Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant les méthodes d´analyse de référence en matière de moutarde.

Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant les méthodes d´analyse de référence en matière

de moutarde.

Le Ministre de la Santé Publique et de l´Environnement,

Vu l´article 7 du règlement grand-ducal-du 25 février 1972 concernant la moutarde;

Vu la décision du Conseil de Ministres de l´Union Economique Benelux M(76)3 du 26 janvier 1976;

Vu l´avis de la Chambre de Commerce;

Vu l´avis de la Chambre des Métiers;

Considérant qu´il y a lieu d´éviter des contestations nées de l´application de techniques d´analyse

différentes ou de l´emploi de normes différentes;

Considérant qu´en particulier l´harmonisation du contrôle des denrées alimentaires exige la mise en

uvre de techniques identiques ou équivalentes et l´emploi de modes d´expression semblables et le

recours à des normes identiques ou équivalentes;

Arrête

Les méthodes d´analyse fixées à l´annexe du présent règlement sont les seules méthodes

de référence valables pour les produits visés par le règlement grand-ducal du 25 février 1972 concernant

la moutarde.

Les méthodes d´analyse et de contrôle décrites à l´annexe du présent règlement sont les

seules méthodes de référence valables pour les produits et préparations visés par le règlement grand-

ducal du 1er octobre 1975 concernant les extraits de viande, les arômes liquides, les condiments en

poudre, les bouillons et les potages.

Les méthodes d´analyse fixées à l´annexe du présent règlement sont les seules méthodes

de référence valables pour les produits visés par le règlement grand-ducal du 22 octobre 1970 relatif

au sel destiné à la consommation humaine.

La méthode d´analyse fixée à l´annexe du présent règlement est la seule méthode de réfé-

rence valable pour la recherche et l´identification des colorants synthétiques solubles dans l´eau, pré-

sents dans les boissons et denrées alimentaires.

Le présent règlement ainsi que l´annexe seront publiés au Mémorial.

Luxembourg, le 15 avril 1977.

Le Ministre de la Santé Publique

et de l´Environnement,

Emile Krieps

ANNEXE

Méthode d´analyse de référence en matière de moutarde

1. Préparation de l´échantillon

Avant chaque prélèvement homogénéiser soigneusement l´échantillon.

2. Humidité

Réactifs

 Sable traité à l´acide chlorhydrique, lavé jusqu´à disparition des chlorures et séché

 Ethanol, 96 vol %.

2.1. Tarer une capsule à fond plat, munie d´un couvercle et contenant 20 à 25 g de sable ainsi qu´une

baguette de verre.

Y déposer 5 g de la denrée et à l´aide de la baguette de verre, mélanger, en ajoutant un peu

d´éthanol, jusqu´à consistance pâteuse.

2.2. Evaporer pendant deux heures au bain-marie puis sécher dans une étuce à 102-105°C jusqu´à

poids constant.

3. Cendres

Réactifs

 Acide sulfurique p.s. 1,84

 Carbonate d´ammonium p.a.

3.1. Calciner une capsule de porcelaine ou de platine, laisser refroidir dans un dessiccateur et peser

exactement (W0g).

3.2. Peser exactement 2 à 5 g de l´échantillon dans la capsule (le poids de l´échantillon + la capsule =

W1g).

3.3. Mélanger avec 1 ml d´acide sulfurique.

Chasser l´excès d´acide sulfurique par un chauffage modéré et calciner.

3.4. Si les cendres contiennent encore des parcelles de carbone, répéter cette opération avec quelques

gouttes d´acide sulfurique.



œ

3.5. Laisser refroidir. Ajouter un peu de carbonate d´ammonium et calciner à nouveau.

3.6. Laisser refroidir dans un dessiccateur et peser exactement (W2g).

3.7. Calculer la teneur en cendres sulfatées (A), en pour-cent, par la formule

La teneur en cendres en pour-cent est égale à 0,8 × A.

4. Sable

Réactifs

 Acide chlorhydrique 4n.

4.1. Ajouter 25 ml d´acide chlorhydrique aux cendres sulfatées obtenues selon 2.

4.2. Recouvrir la capsule d´un verre de montre, faire boullir prudemment pendant 10 minutes et laisser

refroidir.

4.3. Filtrer le résidu sur un filtre sans cendres. Laver à l´eau chaude jusqu´à disparition de la réaction

acide. Calciner le filtre.

4.4. Laisser refroidir dans un dessiccateur et peser.

Répéter la calcination et le refroidissement jusqu´à ce que la différence entre deux pesées succes-

sives soit inférieure à 1 mg (W3g).

4.5. Calculer la teneur en sable (Z) en pour-cent, par la formule

5. Chlorure de sodium dans la moutarde

Réactifs

Acide nitrique 65%

Solution de permanganate de potassium 5%

Solution de nitrate d´argent 0,1 n

Solution de thiocyanate de potassium 0,1 n

Fer (III) ammonium sulfate: Solution saturée.

5.1. Dans un vase conique de 300 ml, introduire 3 à 4 g (p grammes) de l´échantillon pesé exactement

et ajouter 40,00 ml de solution de nitrate d´argent. Mélanger soigneusement, ajouter 15 ml

d´acide nitrique et porter prudemment le contenu du vase à ébullition. Au liquide bouillant,

ajouter 3 fois 5 ml de solution de permanganate de potassium. Agiter après chaque adjonction.

Maintenir quelque temps l´ébullition après la dernière adjonction. Ajouter ensuite 50 ml d´eau.

5.2. Filtrer le contenu du vase sur un papier filtre, dans un ballon jaugé de 200 ml. Laver soigneusement

le filtre et le vase conique avec de l´eau. Compléter au trait avec de l´eau et mélanger.

5.3. Titrer 100 ml de la solution obtenue en 5.2., par la solution de thiocyanate de potassium (a ml)

en présence de 2 ml de solution de fer (III) ammonium sulfate. Titrer ensuite 20.00 ml de solution

de nitrate d´argent à l´aide de la solution de thiocyanate de potassium (b ml).

5.4. La teneur en chlorure de sodium de la denrée est

où

n = le titre de la solution de thiocyanate de potassium.

6. Colorants

La recherche des colorants synthétiques s´effectue conformément aux dispositions des règlements

ministériels correspondants

 Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant la méthode de référence valable pour la recherche

et l´identification des colorants synthétiques, solubles dans l´eau, présents dans les denrées ali-

mentaires

 Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant la méthode d´analyse de référence, valable pour la

recherche et l´identification des colorants liposolubles présents dans les denrées alimentaires.

7. Anhydride sulfureux

Réactifs

 azote, chimiquement pur en bonbonnes

 acide phosphorique, 85% pro analysi

 eau oxygénée, 0,2%

Diluer 0,7 ml d´eau oxygénée à 30% avec de l´eau jusqu´à 100 ml. Préparer cette solution ex-

temporanément.

 hydroxyde de sodium 0,01 n

Déterminer son titre par le phtalate acide de potassium

 méthanol, pro analysi

 solution d´indicateur

Mélanger 100 ml de solution alcoolique de rouge méthyle (0,03% p/v) et 100 ml de solution

alcoolique de bleu de méthylène (0,05% p/v).

Filtrer.

 appareil de distillation (voir fig. 1).

7.1. Dans le récepteur de l´appareil de distillation, introduire 10 ml de la solution d´eau oxygénée

et 60 ml d´eau distillée. Ajouter quelques gouttes de la solution du mélange indicateur et neutra-

liser au besoin par une ou deux gouttes d´hydroxyde de sodium 0,01 n.

7.2. Fixer le récepteur de l´appareil de distillation. Brancher en série, sur le récepteur, un flacon

laveur contenant 25 ml d´eau oxygénée également neutralisée.

7.3. Peser 40 g de la denrée dans le ballon de distillation de 250 ml et ajouter successivement 50 ml

d´eau distillée et 50 ml de méthanol. Mélanger aussi intimement que possible.

7.4. Après avoir fixé le ballon à l´appareil, chasser l´air par un courant d´azote pendant 10 minutes.

La vitesse du courant gazeux pendant la distillation doit être réglée de telle sorte que l´on puisse

compter les bulles de gaz dans le flacon laveur.

7.5. Par l´ampoule à décantation, ajouter 15 ml d´acide phosphorique après avoir enlevé le bouchon

de verre du récepteur.

Replacer celui-ci.

7.6. Après avoir bien mélangé le contenu du ballon, porter à ébullition modérée pendant 30 minutes

exactement. Eviter toute surchauffe de la partie inférieure du ballon.

7.7. Détacher le récepteur de l´appareil de distillation, couper le courant d´azote et rincer le conduit

plongeant dans le récepteur avec de l´eau distillée.

7.8. Titrer le contenu du récepteur à l´aide de l´hydroxyde de sodium jusqu´à virage au vert de l´indica-

teur.

7.9. Calculer la teneur en anhydride sulfureux, exprimée en milligrammes par kilogramme, à l´aide de

la formule

où

V = le nombre de millilitres d´hydroxyde de sodium utilisés pour le titrage

N = la normalité de l´hydroxyde de sodium

P = la masse en grammes de l´échantillon

Voir figure 1.

8. Teneur en huile de moutarde

Par teneur en huile de moutarde, on entend la teneur en extrait éthéré total.

Réactifs

 Ether diéthylique, sec et exempt de peroxyde

 Sable lavé à l´acide chlorhydrique et calciné.

8.1. Mélanger 10 grammes de l´échantillon et environ 30 grammes de sable dans une capsule de quartz,

d´aluminium ou de porcelaine, munie d´une baguette.

Chauffer la capsule et son contenu au bain-marie jusqu´à ce que le mélange soit pratiquement

sec. Chauffer encore quelques temps dans une étuve à la température de 102-105° C.

8.2. Homogénéiser le mélange séché et le transférer quantitativement dans une cartouche de papier

d´un extracteur Soxhlet. Placer la cartouche dans l´extracteur et extraire à l´éther pendant 16

heures.

8.3. Distiller l´éther au bain d´eau et sécher le résidu pendant 30 minutes dans une étuve à la tempéra-

ture de 102-105° C. Reforidir à la température ambiante et peser.

8.4. La teneur en huile de moutarde de la denrée est de

où

W = la masse, en grammes, du résidu

P = le nombre de grammes de la denrée mise en oeuvre.

9. Cellulose

9.1. Réactifs

 éthanol 96% (v/v)

 éther diéthylique

 acide acétique 70 % (v/v)

 acide nitrique conc. (d = 1,40)

 solution saturée d´acide trichloracétique dans de l´eau

 filtres sans cendre

9.2. Mode opératoire

9.2.1.

Peser, à 1mg près, 10 grammes de moutarde dans un vase conique de 500 ml, ajouter 50 ml

d´alcool et agiter énergiquement. Ajouter 40 ml d´éther, agiter à nouveau énergiquement et

laisser reposer pendant 5 min.

9.2.2.

Evacuer prudemment la couche d´alcool-éther et extraire encore à deux reprises le contenu

du vase, chaque fois avec 40 ml d´éther puis, après la dernière extraction, évaoprer sous vide

les restes d´éther présents dans le vase.

9.2.3.

Ajouter, au résidu dans le vase, 200 ml d´une solution obtenue en mélangeant

225 ml d´acide acétique 70% (v/v)

15 ml d´acide nitrique conc.

6 ml de solution saturée d´acide trichloracétique.

Introduire quelques fragments de pierre-ponce dans le vase et faire boullir pendant 30 min.

sous reflux.

9.2.4.

Filtrer le contenu encore chaud du vase sur un entonnoir Büchner contenant un filtre sans cendre

taré.

Laver le résidu d´abord à l´eau bouillante jusqu´à disparition de la réaction acide, puis à l´aide

de 20 ml d´éthanol et de 20 ml d´éther.

9.2.5.

Déposer le filtre dans une capsule de calcination et déterminer, par dessication à 103 ± 2° C

jusqu´à poids constant, le poids du résidu à 1 mg prés (a grammes).

9.2.6. Calciner le filtre et le résidu à 600° C et, après avoir refroidi la capsule de calcination jusqu´à

la température ambiante dans un dessicateur, déterminer le poids des cendres à 1 mg près

(b grammes).

9.3. Calcul

La teneur en cellulose de la denrée en % (m/m) est de

Le poids du dépôt à blanc est le poids du résidu 9.2.5. obtenu en effectuant une détermination

à blanc à partir du point 9.2.3..

La teneur en cellulose de la denrée en % (m/m) de la matière sèche est de

où

a = le poids, en grammes du résidu de l´échantillon (9.2.5.)

poids dépôt « à blanc » = le poids, en grammes, du résidu de la détermination à blanc (9.2.5.)

b = le poids des cendres en grammes (9.2.6.)

V = la teneur en humidité de la denrée en % (m/m).

Règlement

ministériel du 15 avril 1977 fixant les méthodes d´analyse de référence des ex-

traits de viande, des bouillons de viande et des potages.

Le Ministre de la Santé Publique et de l´Environnement,

Vu l´article 10 du règlement grand-ducal du 1er octobre 1975 concernant les extraits de viande, les

arômes liquides, les condiments en poudre, les bouillons et les potages;

Vu la Décision du Comité de Ministres de l´Union Economique Benelux M(72)12 du 11 avril 1972;

Vu la Décision du Comité de Ministres de l´Union Economique Benelux M(72)14 du 29 mai 1972;

Vu la Décision du Comité de Ministres de l´Union Economique Benelux M(76)4 du 26 janvier 1976;

Vu la Décision du Comité de Ministres de l´Union Economique Benelux M(76)5 du 26 janvier 1976;

Vu l´avis de la Chambre de Commerce;

Vu l´avis de la Chambre des Métiers;

Considérant qu´il y a lieu d´éviter des contestations nées de l´application de techniques d´analyses

différentes ou de l´emploi de normes différentes;

Considérant qu´en particulier l´harmonisation du contrôle des denrées alimentaires exige la mise

en oeuvre de techniques identiques ou équivalentes et l´emploi de modes d´expression semblables et

le recours à des normes identiques ou équivalentes;

Arrête

Le présent règlement sera publié au Mémorial avec son annexe.

Luxembourg, le 15 avril 1977

Le Ministre de la Santé Publique

et de l´Environnement,

Emile Krieps

ANNEXE

I Méthodes d´analyse de référence en matière d´extrait de viande et de bouillons de viande

1. 1. HUMIDITE

Réactif

 Sable traité à l´acide chlorhydrique, lavé jusqu´à disparition des chlorures et séché.

1.1. Tarer une capsule à fond plat avec couvercle renfermant 20 à 25 g de sable et munie d´une baguette

de verre. Y déposer une quantité de la denrée contenant 1 à 2 g de matière sèche. Peser couvercle

fermé.

Si la denrée est complètement soluble dans l´eau, prélever un volume de solution renfermant un

poids équivalent de matière sèche.

1.2. Au besoin, en s´aidant de la baguette de verre, réduire la denrée en pâte fluide après addition

d´un peu d´eau distillée. Evaporer au bain-marie, puis dessécher à l´étuve à 103 ± 2° C jusqu´à

poids constant. Conserver la matière sèche pour le dosage de la matière grasse.

2. CREATININE

Réactifs

 Oxyde d´aluminium selon Brockmann

 Amberlite I.R. 120 (H)

La résine neuve, non encore utilisée, est lavée à l´eau jusqu´à ce que l´eau de lavage soit incolore.

La résine est ainsi prête à l´emploi.

La résine utilisée peut être régénérée comme suit

déposer 500 g de résine dans une colonne de verre rétrécie et munie d´un tampon d´ouate.

Laver la résine à l´aide d´eau déminéralisée jusqu´à ce que l´eau de lavage ne colore plus en bleu

du papier de tournesol rouge. Laver ensuite avec 2½ I de HCL 2n, en 25 à 30 minutes au mi-

nimum. Laver ensuite à l´aide d´environ 10 I d´eau, jusqu´à ce que l´eau de lavage ne colore plus

en rouge du papier de tournesol bleu.

Conserver la résine, sous eau, dans un pot de verre fermé. Utiliser de la nouvelle résine tous les

six mois.

Contrôler régulièrement la résine à l´aide de la solution étalon de créatinine.

 Acide chlorhydrique 4 n

 Ammoniaque 1%

 Solution aqueuse d´acide picrique 1,2%

 Solution d´acide trichloracétique 20%

 Solution d´hydroxyde de sodium 4 n

 Solution étalon de créatinine

Dans un matras jaugé de 1 L, dissoudre 1,603 g de sel double de créatinine et de chlorure

de zinc dans 500 ml d´eau distillée; ajouter 100 ml d´acide chlorhydrique n et compléter à

1 L avec de l´eau distillée. Cette solution renferme 1mg de créatinine par ml. Elle se conserve

pendant six mois.

2.1. Dans un matras jaugé de 100 ml, dissoudre dans de l´eau chaude un poids de la denrée tel que la

solution finale contienne une quantité de créatinine de l´ordre de 0,045 mg par ml. Mélanger,

refroidir et compléter à 100 ml par de l´eau distillée. Centrifuger le mélange obtenu. Filtrer le

liquide après centrifugation sur un filtre plissé pour éliminer éventuellement la graisse surna-

geante.

2.2. Transférer 50 ml du filtrat dans un matras jaugé de 100 ml, ajouter 10 ml d´acide trichloracétique,

mélanger, placer le matras dans un bain-marie bouillant. Refroidir après 15 minutes et compléter

à 100 ml par de l´eau distillée. Filtrer le mélange.

2.3. Pipeter 20 ml du filtrat dans une capsule de porcelaine et ajouter 10 ml d´acide chlorhydrique

4 n. Evaporer à sec au bain-marie. Après refroidissement, reprendre le résidu par 15 ml d´eau

et filtrer la solution, en aspirant légèrement, sur une colonne d´oxyde d´aluminium préparée

en déposant successivement un tampon d´ouate, puis 3 g d´oxyde d´aluminium dans un tube de

verre de 8 mm de diamètre dont la partie inférieure est rétrécie.

2.4. Pipeter 10 ml de l´éluat obtenu sous 2.3., sur une colonne d´amberlite préparée en déposant

successivement dans un tube de verre de 10 mm de diamètre pourvu d´un robinet à sa partie

inférieure un tampon d´ouate puis, par un petit entonnoir, 3 g d´amberlite (résine sèche) dans

de l´eau. Ouvrir légèrement le robinet de telle sorte que le liquide parcourre goutte à goutte,

la colonne en 10 minutes. Laver la colonne par 100 ml d´eau, en une demi-heure environ. Rem-

placer le récipient récepteur par une capsule de porcelaine placée tout près de l´extrémité de

la colonne. Verser environ 75 ml d´ammoniaque 1% sur la colonne de manière à les recueillir

en 40 minutes environ. Evaporer au bain-marie jusqu´à disparition de la majeure partie de l´am-

moniaque. Ajouter 10 ml d´acide chlorhydrique 4 n et évaporer à sec.

2.5. Dissoudre le résidu dans 2 ml d´eau distillée, ajouter 1,5ml de solution d´acide picrique et0,6

ml de solution d´hydroxyde de sodium. Mélanger, laisser reposer 5 minutes exactement. Diluer

le contenu de la capsule avec de l´eau et transvaser le liquide de la capsule dans un matras jaugé

de 50 ml.

2.6. Après un temps déterminé compris entre 5 et 10 minutes, mesurer au photomètre à 487,5 nm,

l´absorption par rapport à un blanc obtenu en ajoutant à 2 ml d´eau, 1,5 ml de solution d´acide

picrique et 0,6 ml d´hydroxyde de sodium. Compléter à 50 ml avec de l´eau distillée.

2.7. En respectant les mêmes conditions de temps, tracer une courbe d´étalonnage en mesurant les

différences d´absorption entre les solutions de concentrations connues de créatinine et l´essai

à blanc. Diluer 10 fois la solution étalon de créatinine avec de l´eau. Pipeter 0,3 ml, 0,8 ml, 1,4

ml, 2.0 ml et 3,0 ml dans une série de capsules de porcelaine. Diluer le contenu des 3 premières

capsules avec de l´eau jusqu´à 2,0 ml. Evaporer à sec le contenu de la dernière capsule au bain-

marie et reprendre le résidu par 2ml d´eau distillée. En outre, pipeter 2 ml d´eau distillée dans

une capsule. Traiter les capsules par l´acide picrique et l´hydroxyde de sodium selon 2.5.

2.8. Calculer la teneur en créatinine de la solution obtenue en 2.5., en comparant, aux valeurs de Ia

courbe d´étalonnage, son absorption mesurée en 2.6. La quantité de denrée pesée en 2.1., est

obtenue en multipliant par 15 la quantité en mg de créatinine contenue dans les 50 ml de la so-

lution préparée en 2.5.

3. CHLORURE DE SODIUM

Réactifs

 Acide nitrique 4 n.

 Acide nitrique concentré p.s. 1,40.

 Persulfate de potassium: K2S2O8.

 Formaldéhyde: solution à 35%.

 Nitrate d´argent: solution 0,1 n.

Faire sécher du nitrate d´argent pendant 2 heures à 150° C et refroidir dans un dessiccateur.

Dissoudre 16,989 g dans de l´eau et diluer jusqu´à 1000 ml.

 Solution de thiocyanate de potassium 0,1 n

Dissoudre environ 9,7 g de thiocyanate de potassium dans de l´eau et diluer jusqu´à 1000 ml.

Déterminer le titre de cette solution, jusqu´à la quatrième décimale, au moyen de la solution

de nitrate d´argent en présence de solution d´indicateur.

 Solution d´indicateur

Dissoudre 200 g de fer (III) ammonium sulfate dans 1000 ml d´eau et ajouter de l´acide nitrique

(d 1,40) jusqu´à disparition de la couleur brune. Conserver la solution dans une bouteille brune.

3.1. Dissoudre 2 à 3 g de la denrée dans de l´eau distillée et filtrer la solution au besoin. Transvaser

la solution ou le filtrat dans un matras jaugé de 500 ml. Acidifier par de l´acide nitrique 4 n et

compléter ensuite à 500 ml au moyen d´eau distillée.

3.2. A 25 ml de la solution ou du filtrat, renfermant au maximum 0,130 g de chlorure de sodium,

ajouter 5 ml d´acide nitrique concentré et 25 ml exactement mesurés de solution de nitrate

d´argent 0,1 n.

Porter ensuite à ébullition, et, en maintenant une ébullition modérée, ajouter très prudemment

par petites portions, du persulfate de potassium, jusqu´à ce que le liquide surnageant le préci-

pité de chlorure d´argent devienne incolore ou presque, ce qui s´obtient généralement en 5 à

15 minutes.

Ajouter ensuite 5 ml de solution de formaldéhyde et faire bouillir un moment. Après refroidis-

sement ajouter de l´eau distillée jusqu´à volume d´environ 150 ml et titrer l´excès de nitrate

d´argent par la solution de thiocyanate de potassium 0,1 n en présence de 2ml de la solution d´in-

dicateur.

3.3. Calculer comme suit le pourcentage de chlorure de sodium

tAg

= titre en normalité sol. AgNO3

tRh

= titre en normalité sol. thiocyanate de potassium

V

= ml de sol. de thiocyanate de potassium

P

= g de denrée pesée.

4. MATIERE GRASSE

Réactif

 Ether de pétrole P.E. 40-60° C.

Extraire complètement par l´éther de pétrole, la matière sèche obtenue lors du dosage de

l´humidité, Distiller le solvant. Sécher à l´étuve à température de 103 ± 2° C jusqu´à poids

constant. Le résidu est considéré comme étant la matière grasse.

5. RECHERCHE DES COLORANTS

La recherche des colorants synthétiques s´effectue conformément aux dispositions des règlements

ministériels correspondants

 Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant la méthode de référence valable pour la recherche

et l´identification des colorants synthétiques, solubles dans l´eau, présents dans les denrées

alimentaires.

 Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant la méthode d´analyse de référence, valable pour la

recherche et l´identification des colorants liposolubles présents dans les denrées alimentaires.

Il Méthodes d´analyse de référence en matière de potages

1. CHLORURE DE SODIUM

Réactifs

 Acide nitrique concentré p.s. 1,40

 Persulfate de potassium, K2S2O8

 Formaldéhyde: solution à 35%

 Nitrate d´argent: solution 0,1 n

Faire sécher du nitrate d´argent pendant 2 heures à 150° C et refroidir dans un dessiccateur.

Dissoudre 16,989 g dans de l´eau et diluer jusqu´à 1000 ml.

 Thiocyanate de potassium: solution 0,1 n

 Ammonium fer (III) sulfate: solution saturée.

1.1. Dissoudre aussi bien que possible, dans l´eau froide, 5 g de la denrée, réduite préalablement en

poudre si elle est solide, et compléter au volume de 250 ml dans un matras jaugé.

Filtrer si la denrée n´est pas complètement dissoute.

1.2. A 25 ml de la solution ou du filtrat (ou à un volume moindre dilué à 25 ml de l´eau distillée) ren-

fermant au maximum 0,130 g de chlorure de sodium, ajouter 5 ml d´acide nitrique concentré et

25 ml exactement mesuré de solution de nitrate d´argent 0,1 n.

Porter ensuite à ébullition, et, en maintenant une ébullition modérée, ajouter très prudemment

par petites portions, du persulfate de potassium jusqu´à ce que le liquide surnageant le préci-

pité de chlorure d´argent devienne incolore ou presque, ce qui s´obtient généralement en 5 à

15 minutes.

Ajouter ensuite 5 ml de solution de formaldéhyde et faire bouillir un moment. Après refroidis-

sement diluer à l´eau distillée jusqu´à volume d´environ 150 ml et titrer l´excès de nitrate d´ar-

gent par la solution de thiocyanate de potassium 0,1 n en présence de 2ml de la solution d´am-

monium fer (III)

1.3. Calculer comme suit le pourcentage de chlorure de sodium

tAg

= titre en normalité sol. nitrate d´argent

tRh

= titre en normalité sol. thiocyanate de potassium

V1

= nombre de millilitre de thiocyanate de potassium utilisé

V0

= nombre de millilitre de solution ou de filtrat utilisé

P

= g de denrée pesée.

CREATININE

Réactifs

 Oxyde d´aluminium selon Brockmann

 Amberlite I.R. 120 (H)

La résine neuve, non encore utilisée, est lavée à l´eau jusqu´à ce que l´eau de lavage soit incolore.

La résine est ainsi prête à l´emploi.

La résine peut être régénérée comme suit

déposer 500 g de résine dans une colonne de verre rétrécie et munie d´un tampon d´ouate.

Laver la résine à l´aide d´eau déminéralisée jusqu´à ce que l´eau de lavage ne colore plus en bleu

du papier de tournesol rouge. Laver ensuite avec 2½ I de HCL 2n en 25 à 30 minutes au mi-

nimum.

Laver ensuite à l´aide d´environ 10 I d´eau, jusqu´à ce que l´eau de lavage ne colore plus en rouge

du papier de tournesol bleu.

Conserver la résine, sous eau, dans un pot de verre fermé. Utliliser de la nouvelle résine tous

les six

mois.

Contrôler régulièrement la résine à l´aide de solution étalon de créatinine.

 Acide chlorhydrique 4 n

 Ammoniaque 1% (m/v)

 Solution aqueuse d´acide picrique 1,2% (m/v)

 Solution d´acide trichloracétique 20% (m/v)

 Solution d´hydroxyde de sodium 4 n

 Solution-étalon de créatinine

Dans un matras jaugé de 1 L, dissoudre 1,603 g de sel double de créatinine et de chlorure de

zinc dans 500 ml d´eau distillée; ajouter 100 ml d´acide chlorhydrique n et compléter à 1 L avec

de l´eau distillée. Cette solution renferme 1mg de créatinine par ml. Elle se conserve pendant

six mois.

2.1. Dans un matras jaugé de 100 ml, dissoudre dans de l´eau chaude un poids de la denrée tel que la

solution finale contienne une quantité de créatinine de l´ordre de 0,045 mg par ml. Mélanger,

refroidir et compléter à 100 ml par de l´eau distillée. Centrifuger le mélange obtenu. Filtrer le

liquide après centrifugation sur un filtre plissé pour éliminer éventuellement la graisse surna-

geante.

2.2. Transférer 50 ml du filtrat dans un matras jaugé de 100 ml, ajouter 10 ml d´acide trichloracétique,

mélanger, placer le matras dans un bain-marie bouillant. Refroidir après 15 minutes et compléter

à 100 ml par de l´eau distillée. Filtrer le mélange.

2.3. Pipeter 20 ml du filtrat dans une capsule de porcelaine et ajouter 10 ml d´acide chlorhydrique

4 n. Evaporer à sec au bain-marie. Après refroidissement, reprendre le résidu par 15 ml d´eau

et filtrer la solution, en aspirant légèrement, sur une colonne d´oxyde d´aluminium préparée en

déposant successivement un tampon d´ouate, puis 3 g d´oxyde d´aluminium, dans un tube de verre

de 8 mm de diamètre dont la partie inférieure est rétrécie.

2.4. Pipeter 10 ml de l´éluat obtenu sous 2.3., sur une colonne d´amberlite préparée en déposant

successivement dans un tube de verre de 10 mm de diamètre pourvu d´un robinet à sa partie

inférieure, un tampon d´ouate puis, par un petit entonnoir, 3 g d´amberlite (résine sèche) dans

de l´eau.

Ouvrir légèrement le robinet de telle sorte que le liquide parcoure, goutte à goutte, la colonne

en 10 minutes. Laver la colonne par 100 ml d´eau, en une demi-heure environ. Remplacer le ré-

cipient récepteur par une capsule de porcelaine placée tout près de l´extrémité de la colonne.

Verser environ 75 ml d´ammoniaque 1% sur la colonne de manière à les recueillir en 40 minutes.

Evaporer au bain-marie jusqu´à disparition de la majeure partie de l´ammoniaque. Ajouter 10 ml

d´acide chlorhydrique 4 n et évaporer à sec.

2.5. Dissoudre le résidu dans 2 ml d´eau distillée, ajouter 1,5 ml de solution d´acide picrique et 0,6

ml de solution d´hydroxyde de sodium. Mélanger, laisser reposer 5 minutes exactement. Diluer

le contenu de la capsule avec de l´eau et transférer le liquide de la capsule dans un matras jaugé

de 50 ml.

2.6. Après un temps déterminé compris entre 5 et 10 minutes, mesurer au photomètre à 487,5 nm,

l´absorption par rapport à un blanc obtenu en ajoutant à 2 ml d´eau, 1,5 ml de solution d´acide

picrique et 0,6 ml d´hydroxyde de sodium. Compléter à 50 ml avec de l´eau distillée.

2.7. En respectant les mêmes conditions de temps, tracer une courbe d´étalonnage en mesurant les

différences d´absorption entre des solutions de concentrations connues de créatinine et l´essai à

blanc. Diluer 10 fois la solution étalon de créatinine avec de l´eau. Pipeter 0,3 ml, 0,8 ml, 1,4 ml,

2,0 ml et 3,0 ml dans une série de capsules de porcelaine. Amener le contenu des 3 premières

capsules avec de l´eau jusqu´à 2,0 ml. Evaporer à sec le contenu de la dernière capsule au bain-

marie et reprendre le résidu par 2 ml d´eau distillée. En outre, pipeter 2 ml d´eau distillée dans

une capsule, Traiter les capsules par l´acide picrique et l´hydroxyde de sodium selon 2.5.

2.8. Calculer la teneur en créatinine de la solution obtenue en 2.5. en comparant, aux valeurs de la

courbe d´étalonnage, son absorption mesurée en 2.6.

La quantité en mg de créatinine obtenue dans la quantité de denrée pesée en 2.1., est obtenue

en multipliant par 15 la quantité en mg de créatinine contenue dans les 50 ml de la solution pré-

parée en 2.5.

3. ANHYDRIDE SULFUREUX

Réactifs

 azote, chimiquement pur en bonbonnes

 acide phosphorique 85% pro analysi

 eau oxygénée, 0,2 %

Diluer 0,7 ml d´eau oxygénée à 30% avec de l´eau jusqu´à 100 ml. Préparer cette solution ex-

temporanément.

 hydroxyde de sodium 0,01 N

Déterminer son titre par le phtalate acide de potassium

 méthanol, pro analysi

 solution d´indicateur

Mélanger 100 ml de solution alcoolique de rouge méthyle (0,03% p/v) et 100 ml de solution

alcoolique de bleu de méthylène (0,05% p/v). Filtrer.

 appareil de distillation (voir fig. 1)

3.1. Dans le récepteur de l´appareil de distillation, introduire 10 ml de la solution d´eau oxygénée

et 60 ml d´eau distillée. Ajouter quelques gouttes de la solution du mélange indicateur et neu-

traliser au besoin par une ou deux gouttes de soude 0,01 N.

3.2. Fixer le récepteur de l´appareil de distillation. Brancher en série, sur le récepteur, un flacon

laveur contenant 25 ml d´eau oxygénée également neutralisée.

3.3. Peser 50 g du produit préparé ou 5 à 10 g de la denrée sous forme deshydratée dans le ballon

de distillation de 250 ml et ajouter successivement 50 ml d´eau distillée et 50 ml de méthanol.

Mélanger aussi intimement que possible.

3.4. Après avoir fixé le ballon à l´appareil, chasser l´air par un courant d´azote pendant 10 minutes.

La vitesse du courant gazeux pendant la distillation doit être réglée de telle sorte que l´on puisse

compter les bulles de gaz dans le flacon laveur.

3.5. Par l´ampoule à décantation, ajouter 15 ml d´acide phosphorique après avoir enlevé le bouchon

de verre du récepteur. Replacer celui-ci.

3.6. Après avoir bien mélangé le contenu du ballon, porter à ébullition et maintenir une ébullition

modérée pendant 30 minutes exactement. Eviter toute surchauffe de la partie inférieure du ballon.

3.7. Détacher le récepteur de l´appareil de distillation, couper le courant d´azote et rincer le conduit

du récepteur avec de l´eau distillée.

3.8. Titrer le contenu du récepteur à l´aide de l´hydroxyde de sodium jusqu´à virage au vert de l´in-

dicateur.

3.9. Calculer la teneur en dioxyde de soufre, exprimée en milligrammes par kilogramme, à l´aide de

la formule

où

V = le nombre de millilitres de soude utilisés pour le titrage

N = la normalité de l´hydroxyde de sodium

P = le poids en grammes de la denrée mise en oeuvre.

Voir figure 1.

4. RECHERCHE DES COLORANTS

La recherche des colorants synthétiques s´effectue conformément aux dispositions des règlements

ministériels correspondants

 Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant la méthode de référence valable pour la recherche

et l´identification des colorants synthétiques, solubles dans l´eau, présents dans les denrées ali-

mentaires.

 Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant la méthode d´analyse de référence, valable pour

la recherche et l´identification des colorants liposolubles présents dans les denrées alimentaires.

5. DETERMINATION DU NOMBRE DE MICRO-ORGANISMES AEROBIES ET ANAEROBIES

REVIVIFIABLES

Cette méthode fera l´objet d´un complément au présent règlement.

6. EPREUVE DE STERILITE

Cette méthode fera l´objet d´un complément au présent règlement.

Règlement ministériel du 15 avril 1977 fixant les méthodes d´analyse de référence en matière

de sel destiné à la consommation humaine.

Le Ministre de la Santé Publique et de l´Environnement,

Vu l´article 6 du règlement grand-ducal du 22 octobre 1970 relatif au sel destiné à la consommation

humaine;

Vu la décision du Comité de Ministres de l´Union Economique Benelux M(76)2 du 26 janvier 1976;

Vu l´avis de la Chambre de Commerce;

Vu l´avis de la Chambre des Métiers;

Considérant qu´il y a lieu d´éviter des contestations nées de l´application de techniques d´analyse

différentes ou de l´emploi de normes différentes;

Considérant qu´en particulier l´harmonisation du contrôle des denrées alimentaires exige la mise en

uvre de techniques identiques ou équivalentes et l´emploi de modes d´expression semblables et le

recours à des normes identiques ou équivalentes.

Arrête

Le présent règlement ainsi que l´annexe seront publiés au Mémorial.

Luxembourg, le 15 avril 1977.

Le Ministre de la Santé Publique

et de l´Environnement,

Emile Krieps

ANNEXE

Méthode d´analyse de référence en matière de sel

1. Teneur en chlorure de sodium du sel

Réactifs

Thiocyanate de potassium 0,1 n

Nitrobenzène

Acide nitrique 4 n

Fer III sulfate d´ammonium: solution saturée

Nitrate d´argent 0,1 n

1.1. Peser environ 0,6 g de sel à 1 mg près, dissoudre dans un ballon jaugé de 100 ml, compléter et

pipeter 10 ml dans un vase conique de 300 ml.

Ajouter 5 ml d´acide nitrique et 1 ml de solution saturée de fer III sulfate d´ammonium.

Pipeter 25 ml de nitrate d´argent dans le vase conique, ajouter 3 ml de nitrobenzène, agiter fortement

jusqu´à précipitation. A l´aide de la solution de thiocyanate de potassium titrer en retour l´excès

de nitrate d´argent.

Calculer la teneur en chlorure de sodium

t1 = titre AgNO3

t2 = titre KCNS

V = nombre de ml de KCNS utilisés

M = quantité, en grammes, de l´échantillon pesé.

œ



2. Humidité

2.1. Peser environ 2 g de sel, à 1 mg près, dans une capsule de porcelaine préalablement séchée. Sécher

à ± 105° C jusqu´à poids constant.

a = quantité de sel pesée, en grammes

b = perte de poids du sel en grammes.

3. Dosage de l´hexacyanoferrate de potassium (II) dans le sel de cuisine

Réactifs

Hydroxyde de potassium 0,1 n

Acide sulfurique 4 n

Réactif chromogène: dissoudre 100 g de sulfate d´ammonium-fer (II) p.a. et 10 g de sulfate d´ammo-

nium-fer (III) p.a. dans de l´eau distillée additionnée de 50 ml d´acide sulfurique 4 n. Porter à 1000 ml

avec de l´eau distillée. Conserver la solution dans un flacon de verre foncé.

Réactif au phosphate: dissoudre 70 g de dihydrogènophosphate de potassium dans de l´eau distillée

contenant 12,5 ml d´acide sulfurique 4 n. Porter à 1000 ml avec de l´eau distillée.

Solution étalon d´hexacyanoferrate (II) de potassium: dissoudre 11,47 g d´hexacyanoferrate (II)

de potassium p.a. dans 800 ml d´eau exempte de CO2. Ajouter 10 ml d´hydroxyde de potassium 0,1 n

et compléter jusqu´à 1000 ml avec de l´eau exempte de CO2. Conserver cette solution étalon con-

centrée dans l´obscurité.

Pipeter 10 ml de la solution étalon concentrée dans un ballon jaugé de 1 L. Ajouter 10 ml d´hydroxyde

de potassium 0,1 n et compléter jusqu´au trait avec de l´eau distillée. Cette solution doit être pré-

parée extemporanément.

1 ml de la solution étalon diluée = 0,1 mg de K4Fe(CN)6.

3.1. Peser exactement 10 g de l´échantillon dans un vase conique de 100 ml à bouchon rodé. Dissoudre

dans 40 ml d´eau distillée. Ajouter 2 ml d´hydroxyde de potassium, boucher le vase et agiter.

Ajouter 1 ml d´acide sulfurique et 2 ml de réactif chromogène, agiter vivement et laisser reposer

pendant 2 minutes.

Ajouter ensuite 3 ml de réactif au phosphate et agiter. Transférer la solution dans une cuvette de

colorimètre de 50 ml.

3.2. Après 5 minutes, comparer la coloration à une échelle de référence préparée comme suit.

3.3. A 10 g de chlorure de sodium p.a., ajouter respectivement 0,2  0,3  0,4  0,5  0,6 et 0,7 ml

de la solution étalon diluée et procéder comme il est dit ci-dessus pour l´échantillon. Préparer

toujours l´échelle de référence au moment de l´examen de l´échantillon.

4. Composants insolubles

4.1. Peser environ 10 g de sel, à 10 mg près. Dissoudre dans ± 50 ml d´eau et filtrer sur un creuset

filtrant G4 séché et taré. Laver le creuset à l´aide de ± 35 ml d´eau. Recueillir le filtrat et l´eau de

lavage dans un ballon jaugé de 100 ml, compléter jusqu´à 100 ml et mélanger. Cette solution est

utilisée pour le dosage du SiO2 colloidal dissous.

4.2.

Poursuivre le lavage du creuset à l´eau jusqu´à ce que l´eau de lavage soit exempte de chlorure.

Sécher le creuset et peser.

4.3. Teneur en composants insolubles: O

a = quantité pesée de sel en grammes

b = composants insolubles dans le creuset, en grammes.

5. Silicate colloidal dissous

Réactifs

Tous les réactifs sont préparés avec de l´eau contenant le moins possible de silicate, ce que l´on

obtient en la distillant ou la déminéralisant soigneusement. Conserver l´eau et tous les réactifs dans

des flacons de polythène.

 Solution de molybdate: dissoudre 89 g de molybdate d´ammonium [(NH4)6Mo7O24 4H2O)] dans

800 ml d´eau. Tout en mélangeant ajouter prudemment 62 ml d´acide sulfurique (d 1,84) à environ

50 ml d´eau et laisser refroidir jusqu´à température ambiante.

Tout en remuant, ajouter prudemment cet acide dilué à la solution de molybdate également

froide, diluer à 1 litre et mélanger.

 Solution d´acide tartrique: dissoudre 25 g d´acide tartrique dans 100 ml d´eau.

 Solution réductrice: dissoudre 2,4 g de sulfite de sodium (Na2SO3 7H20) et 200 mg de 1-amino-

2-naphtol 4 acide sulfonique dans environ 70 ml d´eau. Ajouter ensuite 14 g de disulfite de po-

tassium (K2S2O5) et diluer à 100 ml. Cette solution se conserve pendant une semaine.

 Solution étalon (1 ml = 1,00 mg SiO2): dans une capsule de platine, chauffer au rouge 1,00 g

de fine poudre de quartz pure et 5 g de carbonate de sodium anhydre.

Refroidir lorsque la matière en fusion est devenue limpide. Reprendre par de l´eau et diluer à 1

litre dans un ballon jaugé, mélanger.

Préparer par dilution une solution contenant 25 mg de SiO2 par litre. Cette solution ne se con-

serve pas.

 Appareillage: Un spectrophotomètre pour mesures à 810 nm.

 Des ballons jaugés de 100 ml en pyrex ou autre verre dur qui ne cède pas de SiO2 en quantité

appréciable. Contrôler cette propriété en mesurant l´extinction d´un essai à blanc exécuté

dans les récipients après dégraissage.

5.1. Dans un ballon jaugé de 100 ml, pipeter 50 ml du filtrat obtenu selon 4.1..

5.2. Ajouter 2,5 ml de la solution de molybdate et mélanger.

5.3. Après 10 minutes, ajouter 2,5 ml de la solution d´acide tartrique et mélanger.

5.4. Attendre encore 5 minutes, et ajouter environ 25 ml d´eau et 2 ml de la solution réductrice.

Compléter jusqu´au trait et mélanger.

5.5. Après 30 minutes, mesurer l´extinction corrigée E1 par rapport à un blanc (50 ml d´eau distillée

traitée comme l´échantillon d´analyse), à 810 nm.

5.6. Etablir une droite d´étalonnage en partant d´une série de solutions dont la teneur en SiO2 est

connue

dans des ballons de 100 ml, pipeter 0,2, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, et 10 ml d´une solution étalon

contenant 25 mg de SiO2 par litre, ajouter de l´eau jusqu´à 50 ml et traiter ces solutions comme en

5.2, 5.3 et 5.4.

6. Cuivre et plomb

Réactifs

Utiliser des réactifs de qualité pour analyse. Préparer tous les réactifs à l´aide d´eau distillée puri-

fiée comme suit: distiller, dans un appareil entièrement en verre, de l´eau distillée additionnée d´un

peu d´hydroxyde de sodium et de quelques cristaux de permanganate de potassium. Eviter soigneuse-

ment toute contamination par le plomb, le cuivre et le zinc en conservant les réactifs dans du verre

qui ne cède pas ces métaux à la solution. Poser les mêmes exigences à la verrerie utilisée pour la

recherche. Pour la titration, utiliser de préférence une micro-burette aspirante d´une contenance

de 5 ml protégée de la lumière directe par du papier noir. Une burette ordinaire de 5 ml en verre

brun peut également être utilisée.

Solution de dithizone à 0,1% (solution dz)

Dissoudre 100 mg de dithizone (C13H12N4S) dans 100 ml de chloroforme et conserver cette solution

dans un flacon en verre brun à environ +4° C.

Solution de dithizone diluée pour le dosage du cuivre

Diluer la solution de dithizone ca. 1:10 à l´aide de tétrachlorure de carbone. Titrer la solution pour

faire correspondre 1 ml à 10 ug de cuivre (6.1.1.). Utiliser pour cela la solution témoin de cuivre

Cette solution doit être préparée et titrée chaque jour.

Solution de dithizone diluée pour le dosage du plomb

Diluer la solution de dithizone ca. 1:50 à l´aide de chloroforme. Titrer la solution pour faire corres-

pondre 1 ml à 50 ug de plomb (6.2.1.). Cette solution doit être préparée et titrée chaque jour.

Solution témoin de cuivre : 1 ml = 10 ug de cuivre

Dans un ballon jaugé de 100 ml, dissoudre 100 mg de cuivre électrolytique dans 5 ml d´acide nitrique

4 m et compléter jusqu´à 100 ml à l´aide d´eau distillée (1 ml = 1.000 ug de cuivre).

Cette solution peut également être préparée en dissolvant dans un ballon jaugé de 100 ml, 398 mg

de sulfate de cuivre (CuSO4 .5aq) dans de l´eau distillée, en ajoutant 5 ml d´acide nitrique 4 m et en

complétant jusqu´à 100 ml avec de l´eau distillée.

Pipeter 10 ml de cette solution de cuivre dans un ballon jaugé de 1 litre, ajouter 5 ml d´acide nitrique

4 m et compléter jusqu´au trait par de l´eau distillée.

Solution de citrate de sodium 300 g/l *)

Solution de chlorhydrate d´hydroxylamine 200 g/l *)

Solution de cyanure de potassium 10 g/100 ml

Préparation fraîche chaque semaine.

Acide nitrique 4 m

A l´aide d´eau distillée, compléter jusqu´à 1 litre 269,7 ml d´acide nitrique concentré (66,5% d20

= 1,405).

Acide nitrique 1 m

Diluer de l´acide nitrique 4 m à l´aide d´eau distillée 1:3.

Ammoniaque 25% (d = 0,91)

Ammoniaque environ 3 m

Diluer de l´ammoniaque 25% à l´aide d´eau distillée 1 : 4.

Tampon phtalate acide potassique, pH = 2,2

Dans un ballon jaugé de 1 litre, dissoudre 20,4 g de phtalate acide de potassium (KHC8H4O4) dans de

l´eau distillée et compléter jusqu´au trait. Mélanger. Mélanger 50 ml de cette solution à 46,7 ml

d´acide chlorhydrique 0,1 n et contrôler si la solution-tampon ainsi obtenue a un pH de 2,2.

Chloroforme

Tétrachlorure de carbone

6.1. Cuivre

6.1.1.

Titrer la solution de dithizone diluée pour le dosage du cuivre en pipetant 2 ml de solution

témoin de cuivre (1 ml = 10 ug) dans une ampoule à décantation de 100 ml dans laquelle ont

été transvasés environ 50 ml d´eau.

*) Dissoudre respectivement 300 gr de citrate de sodium et 200 gr de chlorhydrate d´hydroxylamine

dans 750 ml d´eau distillée. Porter le pH de ces solutions à 8,0-8,5 à l´aide d´une solution d´hydroxyde

de sodium 4 n. Agiter quelques minutes avec 10 ml d´une solution dz 0,01% dans du chloroforme.

Eliminer la solution dz verte et laver au chloroforme jusqu´à décoloration. Neutraliser la quantité

utilisée d´hydroxyde de sodium à l´aide d´une quantité équivalente d´acide chlorhydrique. Compléter

jusqu´à 1000 ml avec de l´eau.

6.1.2. Ajouter 1 ml de solution de chlorhydrate d´hydroxylamine, de l´acide nitrique 1 m jusqu´au

pH 2,2 (contrôler à l´aide de papier pH) et 5 ml de tampon de phtalate acide de potassium

(pH 2,2).

6.1.3. A l´aide d´une burette, ajouter 1 ml de solution dz diluée dans du tétrachlorure de carbone et

agiter pendant 3 minutes. Laisser s´écouler la couche violette de tétrachlorure et laver la couche

aqueuse à l´aide de quelques ml de tétrachlorure de carbone. Répéter l´opération avec des

quantités moindres de solution dz diluée jusqu´à ce que ce terme soit atteint, ce que l´on constate

lorsqu´une nouvelle adjonction de solution dz reste verte. Après chaque adjonction de dz laver

la couche aqueuse par quelques ml de tétrachlorure de carbone. Noter le nombre de millilitres

de solution dz utilisé et calculer le nombre de microgrammes de cuivre correspondant à 1 ml

de solution dz. Si nécessaire, diluer cette solution jusqu´à ce que 1 ml corresponde à 10 ug de

cuivre.

6.1.4.

Peser environ 10 g de sel à 10 mg près et les transférer avec 50 ml d´eau dans une ampoule à

décantation de 100 ml. Ne pas filtrer même si la solution est trouble.

6.1.5.

Ajouter 1 ml de solution de chlorhydrate d´hydroxylamine et porter le pH à 0,5 avec de l´acide

nitrique 4 m (contrôler avec du papier pH).

6.1.6.

A l´aide d´une burette, ajouter 0,3 ml de solution dz diluée dans du chloroforme et agiter pendant

3 minutes afin d´éliminer le mercure qui pourrait s´y trouver. Si la solution de dz reste verte

il n´y a pas ou très peu de mercure. Laisser s´écouler la couche de dz, laver avec quelques ml

de chloroforme et poursuivre suivant 6.1 .8.

6.1.7.

Si la couche de chloroforme devient orange (le dithizonate de mercure est orange), la laisser

s´écouler. Répéter l´opération chaque fois à l´aide de 0,3 ml de solution dz jusqu´à ce que la

couleur reste verte. Après chaque extraction de dz laver la couche aqueuse avec quelques ml

de chloroforme.

6.1.8. A l´aide d´ammoniaque 25%, porter la couche aqueuse à pH = 2,2 (contrôler à l´aide de papier

pH) et ajouter 5 ml de tampon de phtalate acide de potassium (pH 2,2).

6.1.9.

A l´aide d´une burette, ajouter 0,5 ml de solution du diluée dans du tétrachlorure de carbone

et agiter pendant 3 minutes. Si la solution de dz reste verte, le sel contient moins de 0,5 mg de

cuivre/kg.

6.1 .10. Si la couche de tétrachlorure devient violette, la laisser s´écouler. Laver la couche aqueuse avec

quelques ml de tétrachlorure de carbone qui sont ensuite éliminés. Poursuivre la titration chaque

fois à l´aide de 0,2 ml de solution dz jusqu´à ce que le terme soit atteint, ce que l´on constate

lorsqu´une nouvelle adjonction de 0,2 ml de solution de dz reste verte après 3 minutes d´agi-

tation.

Après chaque adjonction de dz, laver la couche aqueuse avec quelques ml de tétrachlorure de

carbone.

6.1.11. Noter le nombre de millilitres de solution dz utilisé et calculer la teneur en cuivre en utilisant

la formule suivante

où

a = la quantité de solution de dz en ml

m = le nombre de grammes de sel utilisés pour le dosage.

6.2. Plomb

6.2.1.

Titrer la solution dz diluée pour le dosage du plomb en pipetant 1 ml de la solution témoin de

plomb (1 ml = 10 ug de plomb) dans une ampoule à décantation de 100 ml contenant environ

50 ml d´eau.

6.2.2.

Ajouter 1 ml de solution de citrate de sodium et 1 ml de chlorhydrate d´hydroxylamine. Bien

mélanger.

6.2.3.

A l´aide d´ammoniaque 3 m, ajuster le pH à 8,5 (contrôler avec du papier pH). Ajouter ensuite

1 ml de solution de cyanure de potassium.

6.2.4.

A l´aide d´une burette, ajouter 1 ml de solution dz diluée dans du chloroforme et agiter pendant

3 minutes. Laisser s´écouler la couche rouge de chloroforme et laver avec quelques ml de

chloroforme. Poursuivre la titration en ajoutant chaque fois des petites quantités (0,2 ou 0,3

ml) de solution dz diluée jusqu´à ce que le terme soit atteint, ce que l´on constate lorsqu´une

nouvelle adjonction de 0,2 ml de solution dz reste verte après 3 minutes d´agitation. Laver la

couche aqueuse après chaque adjonction de dz avec quelques ml de chloroforme.

Noter le nombre de millilitres de solution dz utilisé et calculer le nombre de microgrammes

de plomb correspondant à 1 ml de solution dz. Si nécessaire, diluer cette solution jusqu´à ce que

1 ml corresponde à 5 ug de plomb.

6.2.5.

Peser environ 10 g de sel à 10 mg près et le transférer dans une ampoule à décantation de 100 ml

avec environ 50 ml d´eau. Ne pas filtrer même si la solution est trouble.

6.2.6.

Ajouter 1 ml de solution de citrate de sodium et 1 ml de solution de chlorhydrate d´hydroxy-

lamine. Bien mélanger.

6.2.7.

A l´aide d´ammoniaque 3 m, ajuster le pH à 8,5 (contrôler à l´aide de papier pH). Ajouter ensuite

1 ml de solution de cyanure de potassium.

6.2.8. Ajouter quelques gouttes de chloroforme et agiter.

6.2.9. A l´aide d´une burette ajouter 0,2 ml de solution dz diluée dans du chloroforme et agiter pen-

dant 3 minutes. Si la coloration de la solution de dz reste verte, l´échantillon contient moins de

0,1 mg de plomb/kg.

6.2.10. Si la couche de chloroforme devient-rouge, laisser cette couche s´écouler. Laver la couche aqueuse

avec quelques ml de chloroforme qui sont ensuite éliminés. Poursuivre la titration chaque fois

à l´aide de 0,2 ml de solution dz jusqu´à ce que le terme soit atteint, ce que l´on constate lors-

qu´une nouvelle adjonction de 0,2 ml de solution de dz reste verte après 3 minutes d´agitation.

Après chaque adjonction de dz, laver la couche aqueuse avec quelques ml de chloroforme.

6.2.11. Noter le nombre de millimètres de solution dz utilisé et calculer la teneur en plomb en utilisant

la formule suivante

où

b = la quantité, en ml, de solution de dz

m = le nombre de grammes de sel utilisés pour la recherche.

7. Arsenic

7.1. Préparation de l´échantillon

7.1.1.

Peser 10 grammes de sel de cuisine ou de sel nitrité dans un vase conique de 100 ml,

7.1.2.

Les dissoudre dans 40 ml d´eau bidistillée et ajouter 200 mg d´urée p.a. à la solution de sel ni-

trité.

Remarque

Les opérations décrites sous 3 et 5 valent uniquement pour le sel nitrité.

7.1.3.

Porter la solution de sel nitrité jusqu´à ébullition et la refroidir à la température ambiante.

7.1.4. Tout en agitant,-ajouter, aussi bien à la solution de sel nitrité qu´à la solution de sel de cuisine

un mélange, refroidi à la température ambiante, de 10 ml d´eau bidistillée et de 10 ml d´acide

sulfurique 98% (d = 1,84) p.a.

7.1.5.

Faire boullir la solution de sel nitrité jusqu´à ce qu´elle ne dégage plus de gaz et la refroidir à la

température ambiante.

7.1.6.

Exécuter, pour les deux solutions, la détermination de l´arsenic de la façon décrite sous 7.2.

7.2. Mesure de la teneur en arsenic

7.2.1. Principe

Dans la solution de la denrée obtenue sous 7.1.1.) l´arsenic est réduit en arsenic trivalent par

de l´iodure de potassium et du chlorure d´étain (II). L´adjonction de zinc dégage de l´hydrogène

qui réduit l´arsenic en arsenic hydrogéné gazeux. Le gaz d´arsenic hydrogéné est transféré,

par une solution de diéthyldithiocarbamate d´argent dans de la pyridine qui, de ce fait, prend

une teinte allant du rouge clair au rouge foncé, en fonction de la concentration d´arsenic dans

le résidu.

L´extinction de la solution de pyridine est mesurée à la longueur d´onde de 526 nm.

7.2.2. Considérations générales

La verrerie décrite dans la présente prescription doit être traitée pendant 24 heures dans un

bac contenant de l´acide nitrique 4 N et est, juste avant l´emploi, rincée à deux reprises à l´eau

distillée puis à l´eau bidistillée. La verrerie jaugée doit ensuite être séchée. Les produits chimiques

doivent avoir une teneur en arsenic aussi faible que possible et sont, de préférence, de qualité

p.a.

Sauf indication contraire, l´eau utilisée doit être de qualité bidistillée.

7.2.3.

Appareillage et accessoires

2.3.1.

Appareil pour la détermination de l´arsenic constitué comme suit

 un vase conique A, de 100 ml

 un rectificateur B

 une colonne d´absorption C

2.3.2.

Bain-marie à thermostat ajusté à 55° C.

2.3.3.

Bain-marie à thermostat ajusté à 15° C.

2.3.4. Feuille d´aluminium.

2.3.5.

Spectrophotomètre à longueur d´onde ajustable en permanence.

7.2.4. Réactifs

2.4.1. Acide chlorhydrique 36% (d = 1,18) p.a.

2.4.2. Acide sulfurique 98% (d = 1,84) p.a.

2.4.3.

Trioxyde d´arsenic (As2O3) p.a.

2.4.4.

Diéthyldithiocarbamate d´argent (AgS.CS.N(C2H5)2) p.a. qualité FLUKA *)

2.4.5. Chlorure d´étain (II) p.a. SnCl2.2H2O.

2.4.6. Iodure de potassium p.a.

2.4.7. Pyridine (d = ± 0,980) p.a.

2.4.8. Zinc p.a. granulé, 10 mesh max. 0,000005% d´arsenic, qualité J.T. Baker *).

2.4.9. Hydroxyde de sodium p.a.

2.4.10 .Solution d´hydroxyde de sodium. Dissoudre 350 g d´hydroxyde de sodium p.a. dans de l´eau

bidistillée, compléter jusqu´à 1000 ml et mélanger.

*) Les marques mentionnées ne constituent pas une recommandation, mais une simple identification

2.4.11. Solution d´iodure de potassium 15% (m/v). Dissoudre 15 g d´iodure de potassium (2.4.6.)

dans de l´eau bidistillée, verser jusqu´au trait dans un ballon jaugé de 100 ml et mélanger.

Conserver la solution dans l´obscurité.

2.4.12. Solution de chlorure d´étain (II). Dissoudre 40 g de SnCl2 (2.4.5.) dans un mélange de 25 ml

d´eau bidistillée et de 75 ml d´acide chlorhydrique (2.4.1.). Si, après quelque temps, un dépôt

se forme ou si la solution devient trouble, il faut préparer une solution fraîche.

2.4.13. Solution de diéthyldithiocarbamate d´argent 0,5% (m/v). Dissoudre 0,5 g de diéthyldithio-

carbamate d´argent (2.4.4.) dans 100 ml de pyridine (2.4.7.).

Conserver la solution dans un flacon bien bouché, en un endroit obscur et frais. La solution

se conserve pendant environ un mois.

2.4.14. Solution étalon d´arsenic.

2.4.14.1. Solution étalon

100 ug As/ml

Dissoudre 0,1320 g de trioxyde d´arsenic (2.4.3.), séché jusqu´à poids constant, dans 20 ml

de solution d´hydroxyde de sodium (2.4.10.).

Transférer quantitativement la solution au moyen de 100 ml d´eau bidistillée dans un ballon

jaugé de 1000 ml, ajouter prudemment, tout en agitant, 10 ml d´acide sulfurique (2.4.2.).

Compléter au trait avec de l´eau bidistillée et mélanger.

2.4.14.2. Solution étalon diluée

1 ug As/ml.

Pipeter extemporairement 10 ml de la solution étalon (2.4.14.1.)

dans un ballon jaugé

de 1000 ml. Compléter au trait avec de l´eau bidistillée et mélanger.

2.4.15. Ouate à l´acétate de plomb

Dissoudre 50 g d´acétate de plomb-Pb (CH3COO)2.3H2O  dans 250 ml d´eau distillée.

Tremper quelques tampons d´ouate dans cette solution, élininer l´excédent d´eau et sécher

l´ouate sous vide dans un exsiccateur. Utiliser du diphosphorepentoxyde (P2O5) comme agent

déssechant.

7.2.5.

Mode opératoire

7.2.5.1.

A la solution obtenue sous VII.1., ajouter 2 ml de solution d´iodure de potassium (2.4.11.),

ajouter 2 ml de solution d´iodure de potassium (2.4.11.), mélanger, déposer 2 ml de solution

de chlorure d´étain (II) (2.4.12.) dans le vase et mélanger une nouvelle fois.

2.5.2.

Disposer, sans l´enfoncer, le bouchon sur le vase conique et placer le tout pendant 15 minutes

dans un bain-marie réglé à 55° C.

2.5.3.

Retirer le vase du bain-marie et le refroidir dans un second bain réglé à 15° C.

2.5.4. Pipeter 5 ml de la solution de diéthyldithiocarbamate d´argent dans la colonne d´absorption

(C) de la figure en annexe II, entourer la colonne de la feuille d´aluminium et déposer un tampon

d´ouate à l´acétate de plomb dans le déflegmateur B.

2.5.5.

Enduire les parties rodées du déflegmateur d´une couche de graisse au silicone et le relier

à la colonne d´absorption à l´aide d´une pince appropriée.

2.5.6. Déposer 5 g de zinc (2.4.8.) dans le vase, placer immédiatement le déflegmateur et la colonne

d´absorption sur le vase. Munir la pièce rodée d´une pince appropriée et placer l´ensemble

pendant une heure dans un bain-marie réglé à 15° C.

Remarque

De grandes quantités d´hydrogène se dégagent lors de la réaction entre le zinc et l´acide

sulfurique. En raison du danger d´explosion, le dosage doit s´effectuer sous une hotte bien

ventilée.

2.5.7.

Dissocier le rectificateur et la colonne d´absorption, mélanger soigneusement le liquide

d´absorption et transférer la solution de pyridine, de teinte rouge clair à rouge foncé, dans

une cuvette de 1 cm.

2.5.8.

Mesurer la densité optique (extinction) de la solution par rapport à la solution de diéthyl-

dithiocarbamate d´argent (2.4.13.) comme référence.

Longueur d´onde 526 nm.

2.5.9.

Exprimer la quantité d´arsenic, en ug, correspondant à l´extinction mesurée, à l´aide d´une

courbe d´étalonnage (7.2.6.) et calculer la teneur en arsenic de l´échantillon en ppm, à l´aide

de la formule

où

a = la quantité notée d´arsenic en ug

p = la quantité, en g, de la denrée pesée.

7.2.6.

Courbe d´étalonnage

2.6.1.

Dans cinq vases coniques de 100 ml pipeter successivement 3, 5, 8, 10 et 15 ml de la solution

étalon diluée (2.4.14.2.)

préparée extemporanément. Ajouter un mélange, refroidi à la

température ambiante, de 30 ml d´eau bidistillée et de 10 ml d´acide sulfurique (2.4.2.),

porter le volume total à 60 ml à l´aide d´eau bidistillée.

2.6.2.

Exécuter les opérations décrites de (2.5.1.) à (2.5.8.) et, sur du papier millimétrique, exprimer

les extinctions trouvées en fonction de la quantité d´arsenic en ug. Les points de mesure

doivent se situer sur une ligne droite, passant par l´origine.

Remarque

II faut contrôler la courbe d´étalonnage lors de chaque préparation d´une solution fraîche

de diéthyldithiocarbamate d´argent.

8. Nitrite: dans le sel nitrité

Réactifs

 Eau distillée exempte d´ions nitrite et nitrate.

 Solution de nitrite de sodium

Dissoudre 500 mg de nitrite de sodium dans de l´eau distillée et diluer jusqu´à 1.000 ml.

Diluer 10 ml de cette solution mère jusqu´à 500 ml dans un ballon jaugé.

1 ml de solution = 10 ug de nitrite de sodium.

 Solution chlorhydrique de sulfanilamide 0,2%

Dissoudre 2,0 g de sulfanilamide dans 800 ml d´eau distillée. Chauffer au besoin. Refroidir et

ajouter 100 ml d´acide chlorhydrique concentré en agitant. Compléter jusqu´à 1.000 ml.

 Solution d´acide chlorhydrique 5 n

Diluer 445 ml d´acide chlorhydrique concentré jusqu´à 1.000 ml avec de l´eau distillée.

 Solution de dichlorure de N- (naphtyl -l)-éthylène diammonium

Dissoudre 100 mg de dichlorure de N-(naphhtyl-1)-éthylène diammonium dans de l´eau distillée

et compléter à 100 ml. Préparer la solution extemporanément.

8.1. Peser, à 0,1 g près, 50 g de sel, les dissoudre dans de l´eau distillée et compléter jusqu´à 500 ml.

8.2. Pipeter 10 ml de cette solution dans un ballon jaugé de 500 ml et compléter au trait.

8.3. A l´aide d´une pipette, transférer dans un ballon jaugé de 100 ml une partie aliquote (p.ex. 5 ml)

de la solution obtenue sous 8.2. Ajouter de l´eau distillée jusqu´à ce que le volume total s´élève

à 60 ml environ. Après mélange ajouter à la pipette 10 ml de solution chlorhydrique de sulfanil-

amide et ensuite 6 ml de solution d´acide chlorhydrique 5 n. Mélanger et laisser reposer pendant

5 minutes.

8.4. Ajouter à l´aide d´une pipette 2 ml de la solution de dichlorure de N-(naphtyl-1)-éthylène diammo-

nium, bien mélanger et laisser reposer pendant 3 minutes. Diluer à 100 ml, mélanger et mesurer

en cuvette de 1 cm la densité optique de la solution à la longueur d´onde de 538 nm par rapport

à de l´eau distillée et à un blanc préparé de façon identique. La différence mesurée de densité

optique entre l´eau distillée et le blanc ne peut dépasser 0,004 S.

8.5. Etablir une droite d´étallonage en mesurant les différences d´absorption entre les solutions ren-

fermant des concentrations connues de nitrite de sodium et le blanc.

A cet effet, pipeter, dans une série de ballons jaugés de 100 ml, respectivement 0,0  2,0  4,0

6,0  8,0  10,0 ml de la solution de référence de nitrite (1 ml = 10 ug). Ajouter à chaque bal-

lon de l´eau jusqu´à ce que le volume total atteigne environ 60 ml. Mélanger et procéder selon

8.3 et 8.4.

8.6. Calculer la teneur en nitrite de sodium en grammes par 100 grammes d´échantillon. A cette fin,

déterminer, à l´aide de la droite d´étalonnage, le nombre de microgrammes de nitrite de sodium

dans 100 ml de solution colorée.

Le pourcentage de nitrite de sodium dans l´échantillon est de

où

a = le nombre de millilitres de solution de sel utilisés en 8.3.

p = le nombre de microgrammes de nitrite de sodium présents dans 100 ml de solution colorée.

Règlement

ministériel du 15 avril 1977 fixant la méthode de référence pour la recherche

et l´identification des colorants synthétiques, solubles dans l´eau, présents dans les

denrées alimentaires.

Le Ministre de la Santé Publique et de l´Environnement,

Vu l´article 11 du règlement grand-ducal du 27 juin 1969 relatif aux matières colorantes pouvant

être employées dans les denrées destinées à l´alimentation humaine;

Vu la décision du Comité de Ministres de l´Union Economique Benelux M(76)10 du 26 janvier 1976;

Vu l´avis de la Chambre de Commerce;

Vu l´avis de la Chambre des Métiers;

Considérant qu´il y a lieu d´éviter des contestations nées de l´application de techniques d´analyse

différentes ou de l´emploi de normes différentes;

Considérant qu´en particulier l´harmonisation du contrôle des denrées alimentaires exige la mise en

uvre de techniques identiques ou équivalentes et l´empoi de modes d´expression semblables et le

recours à des normes identiques ou équivalentes;

Arrête

Le règlement ministériel du 22 novembre 1965 fixant la méthode de référence valable pour

la recherche et l´identification des colorants synthétiques, solubles dans l´eau, présente dans les den-

rées alimentaires, et le règlement ministériel du 24 mai 1967 complétant le règlement précité, sont

abrogés.

Le présent règlement sera publié au Mémorial.

Luxembourg, le 15 avril 1977

Le Ministre de la Santé Publique

et de l´Environnement,

Emile Krieps

ANNEXE

Méthode de référence pour la recherche et l´identification des colorants synthétiques,

solubles dans l´eau, présents dans les denrées alimentaires.

LISTE DES REACTIFS

Solution tampon: pH = 3. Dissoudre dans l´eau distilliée 2 g d´acétate de soldium (CH3COONa〈3H2O),

ajouter 25 ml d´acide acétique glacial et diluer à 1 litre à l´aide d´eau distillée.

Quinoléine: qualité purissimum. Une légère coloration jaune de la quinoleine n´exclut pas son uti-

lisation.

Amberlite: LA2 (BDH, ROHM et HAAS ou équivalent)

Ether diéthylique: exempt de peroxyde

Ammoniaque: 25%, 10%, 5% en poids de NH3

Acide acétique glacial p.a.

Acide chlorhydrique: 1 n

Acétone p.a.

Célite

œ





Chloroforme p.a.

Colorants de référence

Ethanol: 96% vol., 70% vol.

Ether de pétrole: P.E. 40° - 60° C

Sable marin, lavé à l´acide chlorhydrique et calciné

Solution aqueuse de trichlorure de titane: 15% (m/v)

Réactif à la p-diméthylaminobenzaldéhyde: dissoudre 1 g de p-diméthylaminobenzaldéhyde dans

30 ml d´éthanol à 96% vol., ajouter ensuite 180 ml de n. butanol et 30 ml d´acide chlorhydrique à 36%.

n Butanol

Butanol tertiaire (2-méthylpropanol-2)

n Propanol

Pyridine incolore

Acide propionique

Citrate de sodium (Na3C6H5O7〈5½H2O)

Chlorure de potassium

1. Isolement par la quinoléine des colorants synthétiques solubles dans l´eau

1.1.

Mode opératoire applicable aux denrées à forte teneur en sucre, aux boissons alcooliques, aux

produits laitiers.

1.1.1.

Dans le cas d´une denrée solide

traiter une partie de la substance par 4 parties de solution tampon et transférer 30 ml de ce

mélange dans un tube à centrifugation, de préférence bouché à l´émeri, d´une contenance

approximative de 50 ml (longueur 20 cm environ, diamètre extérieur 2 cm environ).

1.1.2.

Dans le cas d´une denrée liquide

introduire directement 10 ml de la denrée dans le tube à centrifugation et ajouter 20 ml de

solution tampon.

1.1.3. Ajouter ensuie dans le tube à centrifugation, 10 ml de quinoléine; agiter énergiquement puis

centrifuger durant 5 minutes à la vitesse de 1.200 tours par minute. Eliminer la solution aqueuse

aussi paraitement que possible par aspitation au moyen d´un tube effilé. Agiter la quinoléine

avec 20 ml d´eau, centrifuger et aspirer complètement la couche aqueuse surnageante. Répéter

ce lavage une seconde fois. Si la quinoléine est trouble, filtrer sur filtre sec dans un autre tube

à centrifugation.

1.1.4.

Ajouter au colorant dissous dans la quinqléine 30 ml d´éther et 1 ml d´eau. Agiter énergique

ment puis centrifuger. Traiter la couche éthéro-quinoléinique selon 1.1.5. et la couche aquese

selon 1.1.6. Certains colorants, comme la nigrosine, floculent par agitation du mélange éther-

quinoléine avec l´eau et adhèrent au verre. Dans ce cas traiter selon 1.1.8.

1.1.5.

Si la couche éthéro-quinoléinique demeure colorée (ce qui peut indiquer la présence d´éry-

throsine, d´éosine, de phloxine et/ou de certains colorants naturels), ajouter dans le tube 2 ml

d´ammoniaque à 10% et agiter énergiquement le tube et son contenu. Après centrifugation

séparer par aspiration la couche supérieure éthéroquinoléique. Conserver cette couche pour

la recherche des colorants basiques (dont la rhodamine B) selon 1.1.7.

La dilution par l´éther change ces colorants en forme incolore qui reste en solution dans la

couche éthéro-quinoléinique. Si, dans la substance à examiner, la rhodamine B est le seul

colorant rouge présent, la décoloration de la quinoléine lors de sa dilution à l´aide d´éther,

constitue une indication valable de la présence de ce colorant.

Traiter la couche aqueuse ammoniacale selon 1.1.9.

1.1.6.

Si la solution aqueuse est colorée l´agiter à quelques reprises avec un peu d´éther et éliminer

l´éther après parfaite séparation des phases. Examiner ensuite la solution aqueuse de colorants

selon 1.1.9.

1.1.7.

Agiter la couche éthéro-quinoléinique, mise en réserve selon les indications en 1.1.5. avec 10 ml

d´acide chlorhydrique 1 n. Une coloration de la phase aqueuse acide indique la présence de

colorants basiques. Cette coloration est rouge dans le cas de la rhodamine B. Centrifuger et

aspirer complètement la couche éthéro-quinoléinique. Agiter la solution aqueuse acide colorée

avec 2 ml de chloroforme et éliminer, après séparation des phases, la couche aqueuse. Laver à

2 reprises la solution chloroformique avec 1 ml d´eau et éliminer, chaque fois, la couche aqueuse.

Examiner le chloroforme contenant la matière colorante selon 1.1.9.

1.1.8.

Redissoudre le colorant précipité dans l´éthanol à 96% vol. Examiner la solution alcoolique du

colorant selon 1.1.9.

1.1.9.

Si la solution purifiée du colorant est à concentration trop faible, évaporer cette solution au

bain-marie, dans une capsule en verre jusqu´à obtention d´un volume plus réduit (environ

0,5 ml). Dans le cas de la solution aqueuse, l´acidifier très légèrement à l´acide acétique avant évapo-

ration. Procéder à l´identification selon 2.

1.2.

Mode opératoire applicable aux denrées à forte teneur en amidon, à forte teneur en matières

protéiques ou contenant des jaunes d´œufs.

1.2.1.

Dans le cas des denrées riches en matières grasses, dégraisser comme suit: Introduire dans un

mortier 10 g de l´échantillon. Triturer avec 3 g de sable marin, 6 à 7 g de célite et 30 à 40 ml

d´acétone. Décanter le liquide surnageant et le filtrer sur un papier filtre plissé. Reprendre le

résidu 3 fois successivement par 30 à 40 ml d´acétone, décanter chaque fois le liquide sur-

nageant et le filtrer. Sécher le résidu dégraissé, d´abord à l´air libre et ensuite durant 30 minutes-

dans l´étuve, et pulvériser.

1.2.2.

Dans le cas des denrées peu riches en matières grasses

dessécher si nécessaire sans dégraissage préalable et pulvériser.

1.2.3.

Introduire dans un mortier 2 g de matière séchée et pulvérisée et 15 ml de quinoléine préalable-

ment saturée d´eau. Extraire le plus parfaitement possible le colorant en triturant quelque

temps la denrée en présence de cette quinoléine. Ajouter 20 ml de solution tampon et triturer

à nouveau pendant quelque temps.

Transférer le tout dans un tube à centrifugation et agiter énergiquement. Centrifuger durant

10 minutes à 1.200 tours/minute, puis éliminer par aspiration la couche aqueuse supérieure.

Si une émulsion s´est formée à l´interphase des couches aqueuse et quinoléinique, l´éliminer

en même temps que la couche aqueuse.

Introduire ensuite 20 ml d´eau, agiter de nouveau énergiquement puis centrifuger 10 minutes.

Eliminer le plus complètement possible la couche aqueuse par aspiration. Filtrer la quinoléine

sur un filtre sec dans un autre tube à centrifugation.

1.2.4.

Introduire dans ce tube 30 ml d´éther et 1 ml d´eau, agiter énergiquement, centrifuger. Re-

cueillir par aspiration la couche éthéro-quinoléinique surnageante, qui peut contenir l´éry-

throsine, l´éosine, la phloxine et la rhodamine B. Rechercher ces colorants selon 1.1.5., 1.1.7.

et 1.1.9.

1.2.5. Après élimination de la couche éthéro-quinoléinique, additionner la solution aqueuse de 20 ml

de splution tampon et de 10 ml de quinoléine. Agiter énergiquement le mlange puis centrifuger

durant 5 minutes.

Eliminer la phase aqueuse puis ajouter 30 ml d´éther et 1 ml d´eau. Agiter de nouveau puis

centrifuger.

Eliminer la couche éthéro-quinoléinique et traiter la solution aqueuse de colorant selon 1.1.6.

et 1.1.9.

1.3.

Mode opératoire applicable aux fruits confits et aux fruits au sirop.

1.3.1. Enlever le sucre superficiel des fruits avec un minimum d´eau. Chauffer ensuite les fruits au

bain-marie avec de l´éthanol 70% vol. jusqu´à dissolution du colorant. Décanter le liquide et

en chasser l´alcool par évaporation tout en réduisant le volume à 10 ml environ. Transférer

cette solution dans un tube à centrifugation, à l´aide de 20 ml de solution tampon, ajouter 10 ml

de quinoléine et traiter ensuite selon les directives données à partir de 1.1.3.

1.4.

Mode opératoire applicable aux produits à base de viande.

1.4.1.

Dégraisser 10 g de l´échantillon comme indiqué en 1.2.1.

1.4.2.

Introduire dans un mortier la matière dégraissée, séchée et pulvérisée. Triturer avec 1.25 ml

d´amberlite LA2, ajouter 15 ml de quinoléine et triturer à nouveau. Ajouter 5 ml d´eau, triturer

et laisser reposer durant 1 heure en triturant de temps à autre. Transvaser le mélange dans un

tube à centrifugation, centrifuger durant 10 minutes à 1.200 tours/minute, décanter le liquide

surnageant sur coton et recueillir le filtrat dans un autre tube à centrifugation. Ajouter 20 ml

de slution tampon et agiter énergiquement.

Centrifuger durant 10 minutes à 1.200 tours/minute, puis éliminer par aspiration la phase

aqueuse surnageante. Si une émulsion s´est formée au niveau de la séparation des phases, éli-

miner celle-ci avec la phsae aqueuse.

Ajouter 20 ml d´eau, agiter à nouveau énergiquement, puis centrifuger. Eliminer aussi complète-

ment que possible la phase aqueuse par aspiration. Filtrer la phase quinoléinique sur un papier-

filtre sec ou sur coton hydrophile et recueillir le filtrat dans un autre tube à centrifugation.

1.4.3. Ajouter 30 ml d´éther diéthylique et 2 ml d´ammoniaque, agiter énergiquement et centrifuger.

Recueillir la phase éthéroquinoléinique surnageante pour la recherche éventuelle de colorants

basiques selon 1.1.7.

Ajouter à la solution ammoniacale 20 ml de solution tampon et 10 ml de quinoléine. Agiter

énergiquement, puis centrifuger. Eliminer la phase acqueuse, ajouter 30 ml d´éther diéthylique

et 2 ml d´ammoniaque. Agiter à nouveau, puis centrifuger.

1.1.4.

Eliminer la phase éthéro-quinoléinique et laver quatre fois la solution ammoniacale avec 5 ml

d´éther diéthylique chaque fois. Poursuivre comme indiqué en 1.1.9.

2. Identification des colorants synthétiques solubles dans l´eau

Appliquer à la solution colorée, obtenue selon les indications données sous 1, la méthode de

séparation par chromatographie sur papier.

Effectuer, en même temps que le chromatogramme du colorant isolé de l´échantillon, des

chromatogrammes de colorants témoins sur la même feuille de papier chromatographique.

Comparer le comportement chromatographique de l´échantillon à celui des colorants témoins,

dans trois phases mobiles appartenant à trois groupes parmi les quatre cités ci-dessous. Sauf

indication contraire, utiliser la chromatographie ascendante.

Les phases mobiles sont à préparer extemporairement.

Groupe n° 1

a) dissoudre 2 g de citrate de sodium dans 100 ml d´ammoniaque à 5%;

b) mélanger 20 volumes de solution acqueuse à 2,5% de citrate de sodium et 1 volume de pyridine.

Groupe n° 2

a) mélanger 50 ml de n. butanol, 10,5 ml d´éthanol 96% vol., 21 ml d´eau, 1 ml d´ammoniaque à 25%;

b) mélanger 50 ml de n. butanol, 25 ml d´éthanol 96% vol., 25 ml d´eau, 10 ml d´ammoniaque à

25% (chromatographie descendante; saturer préalablement la cuve pendant 24 h.)

Groupe n° 3

a) mélanger 50 ml de n. butanol, 26 ml d´éthanol 96% vol., 24 ml d´eau;

b) mélanger 40 ml de n. butanol, 40 ml d´eau, 20 ml de pyridine, 10 ml d´éthçnol 96% vol. (chroma-

tographie descendante; saturer préalablement la cuve pendant 24 h).

Groupe n° 4

mélanger 50 ml de butanol tertiaire (2-méthylpropanol 1-2) et 50 ml de solution acqueuse con-

tenant par litre 4 g de KC1 et 240 ml d´acide propionique.

Dans le cas des colorants autorisés (à l´exception de l´Organge GGN et du Jaune Orangé S) un

colorant et un témoin peuvent être considérés comme identiques si leur comportement chroma-

tographique est le même avec au moins trois phases mobiles différentes.

L´identification de l´Orange GGN, du Jaune Orangé S et du Ponceau SX s´effectue selon 3.

3. Identification

complémentaire de l´Orange GGN. du Jaune Orangé S et du Ponceau SX

Déposer sur la ligne de départ d´une feuille de papier chromatographique des taches du colorant

dont on désire une identification complémentaire ainsi que du colorant témoin et éventuellement

d´acides sulfanilique, naphtionique, métanilique, 2,4-diméthyl-5-aminobenzène-sulfonique et

2,5-diaminobenzènesulfonique.

Sécher les taches à l´aide d´un courant d´air chaud. Déposer sur les taches sèches des colorants

5 microlitres d´un mélange de 2 ml de solution de TiCl3 à 15% et de 9 ml d´eau distillée. Sous

l´influence de ce traitement, les taches seront le plus souvent décolorées. Si tel n´était pas le cas,

répéter le traitement à l´aide de la solution diluée de TiCl3 jusqu´à décoloration complète. Sécher

de nouveau pas un courant d´air chaud les taches ainsi traitées.

Développer en chromatographie descendante à 15-20° C à l´aide du milieu n. propanol (2 vol.) 

ammoniaque à 25% (1 vol.) durant au moins 16 h. Sécher ensuite le chromatogramme à l´air

libre. Pulvériser ensuite le réactif à la p-diméthylaminobenzaldéhyde sur le chromatogramme.

Comparer les résultats obtenus pour le colorant à identifier avec ceux obtenus pour le colorant

témoin et les acides sulfoniques éventuellement déposés sur le papier.

Le tableau ci-après donne les teintes, après vaporisation de p-diméthylaminobenzaldéhyde des

produits de réaction provenant des colorants après réduction.

Réaction avec le réactif à la p-diméthylaminobenzaldéhyde

Numéro-

Acide

Acide

tation

Nom commerical

Index

Acide

Acide

2,4-diméthyl-

Acide

2,5-diamino-

de la

Colour naphtionique sulfanilique

5-amino-

métanilique

benzène-

C.E.E.

benzène

sulfonique

sulfonique

2 éd.

Tache jaune Tache jaune Tache jaune Tache jaune Tache rouge

Rf 0,65

Rf 0,55

Rf 0,70

Rf 0,60

Rf 0,43



Rouge solide E

16.045

+









E 122

Azorubine

14.720

+









E 123

Amarante

16.185

+









E 124

Rouge Cochenille A

16.255

+









E 126

Ponceau 6 R

16.290

+









E 105

Jaune solide

13.015



+





+

E 103

Chrysoine S

14.270



+







E 110

Jaune orangé S

15.985



+







E 102

Tartrazine

19.140



+







E 151

Noir Brillant BN

28.440



+









Ponceau SX

14.700





+





E 111

Orange GGN

15.980

 



+



Les Rf sont des valeurs moyennes obtenues en utilisant le papier S et S 2043 bMgl.

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