Cirkulæreskrivelse om usa - artsbestemmelse af udbenet kød (species testing program)

Cirkulæreskrivelse om usa - artsbestemmelse af udbenet kød (species testing program)

Til samtlige til eksport af fersk kød autoriserede virksomheder og dyrlægerne ved disse.

USA - artsbestemmelse af udbenet kød (species testing program) .

USDA, Washington, har som forudsætning for opretholdelsen af tilladelsen til eksport af udbenet kød til USA forlangt, at der iværksættes et species testing program med 95% sikkerhed for højst 1% fejl. Herudover skal der som hidtil foretages overvågning af, at arten af udbenet kød er i overensstemmelse med det på etiketten og certifikatet angivne.

Programmet omfatter alle virksomheder, som har autorisation til opskæring/udbening og emballering eller til opbevaring af udbenet fersk kød i kartoner.

Undtaget herfra er dog virksomheder med autorisation til opskæring af udenlandsk kød og virksomheder, som alene opskærer kød af en dyreart, og som agter at vedblive hermed.

Samtlige USA-godkendte opskæringsvirksomheder skal derfor sammen med embedsdyrlægen senest den 28. december 1987 indsende meddelelse til Veterinærdirektoratet gennem vedkommende veterinærinspektør om enten

a) ca. mængden af kød, opskåret/udbenet og pakket, i 1987 fordelt på dyreart (okse og svin), eller

b) at virksomheden alene opskærer kød af een dyreart (okse eller svin).

Tilsvarende skal samtlige autoriserede frysehuse indsende meddelelse om mængden af kartonneret fersk kød eksporteret til USA i 1987, fordelt på dyrearter.

på grundlag af disse oplysninger vil Veterinærdirektoratet fastlægge antallet af og tidspunktet for undersøgelser på den enkelte virksomhed, således at veterinærkontrollen fra Veterinærdirektoratets Laboratorium vil få meddelelse, når undersøgelse skal ske.

Undersøgelsen skal på opskæringsvirksomheder omfatte indholdet i mindst 2 kartoner fra den senest forud afsluttede dagsproduktion, og på frysehuse omfatte indholdet i mindst 2 kartoner fra det senest forud modtagne parti udbenet, kartonneret kød uanset oprindelsen, men egnet til eksport til USA.

Indholdet skal underkastes en visuel undersøgelse og bedømmelse af kødets art. Herudover skal foretages en artsbestemmelse efter ORBIT (okse)- eller PRIME (svin)-metoden i henhold til vedlagte beskrivelse af 24. november 1987, der er gældende for begge metoder. De pågældende tests bestilles af embedsdyrlægen for virksomhedens regning ved henvendelse til Veterinærdirektoratets Laboratorium. Prisen for disse tests (til 10 prøver) er p.t. kr. 210,00, incl. forsendelsesomkostninger. Eventuelle spørgsmål vedrørende anvendelsen m.v. bedes rettet til Veterinærdirektoratets Laboratorium.

Resultatet af undersøgelsen opgøres på vedlagte formular (Form. 2075-1985), der skal opbevares i mindst 2 år. Kopi indsendes årligt senest den følgende 10. januar til Veterinærdirektoratets Laboratorium.

Ved mistanke om, at arten af det undersøgte kød ikke er i overensstemmelse med det af virksomheden anførte, skal det pågældende parti tilbageholdes og prøver indsendes for virksomhedens regning til nærmere undersøgelse på Veterinærdirektoratets Laboratorium. Udgiften hertil er 20 points, svarende til kr. 370,00 pr. 1. januar 1988.

Da metoderne alene kan anvendes på kødstykker af en vis størrelse (minimum 5x5x5 cm), skal der fra partier, der består af mindre stykker, tilsvarende indsendes 200 g prøve til undersøgelse på Veterinærdirektoratets Laboratorium.

P.V.V.

K. Hermansen

VETERINÆRDIREKTORATET

J.nr. K.K. 2075-1985

24. november 1987

ORBIT-testen til artsbestemmelse på kød.

Formål .

1. Udføre ORBIT præcist og fuldstændigt.

2. Tolke ORBIT resultater præcist.

3. Træffe passende forholdsregler vedrørende det undersøgte partis anvendelse.

Begrænsninger og særlige forhold .

1. Vejledningen skal følges gennem hele undersøgelsen.

2. Vejledningen skal benyttes ved hver undersøgelse, indtil brugeren kan den udenad.

Forbehold .

Anvendelsen af ORBIT som beskrevet i denne vejledning er begrænset til hele, rå kødstykker.

ORBIT gælder ikke for hakket eller på anden måde findelt kød eller for varmebehandlede kødprodukter.

O.R.B.I.T. KIT .

Hvert sæt indeholder

5 0.R.B.I.T. agarplader

1 glas med 5 skiver med antistof mod oksekød -A

1 glas med 5 skiver med oksekødsantigen som reference -B

1 glas med 10 rene skiver -S

1 stykke sort papir

3 stykker hvidt papir

1 filtpen

10 polyethylen-prøveposer

3 pincetter

Hvert sæt rækker til 10 undersøgelser.

Det videnskabelige grundlag for ORBIT .

ORBIT er et eksempel på en højspecifik antigen-antistof reaktion. Når ganske bestemte antigen-antistof par reagerer, dannes en hvid udfældning i reaktionszonen.

I ORBIT er en -A-skive imprægneret med antistof mod oksekød. Dette antistof afgør ORBIT's specificitet. Antistoffet mod oksekød kan kun reagere og danne synlig udfældning med antigener fra oksekød.

I ORBIT er en -B-skive imprægneret med en referenceprøve af oksekødsantigen. Dette antigen reagerer med antistoffet i -A-skiven, så der dannes en synlig udfældning i form af en linie mellem -A- og - B-skiverne. Dette stykke af linien kaldes oksekøds-referencelinien.

I ORBIT imprægneres -S-skiverne med saft fra en vævsprøve. Hvis prøven faktisk er oksekød, vil saften indeholde oksekødsantigen, og der vil ske en synlig udfældning i form af en linie mellem -A- og -S- skiverne, når oksekødsantigenet fra -S-skiven reagerer med oksekødsantistoffet fra -A-skiven. Hvis prøven ikke er oksekød, vil saften ikke indeholde oksekødsantigen, og der vil ikke ske synlig udfældning.

Agarlaget i ORBIT agarpladerne fungerer som diffusionsmedium for antigenerne og antistofferne og som fikseringsmedium for eventuelle udfældninger. Hvis agarlaget skades, kan dette øve afgørende indflydelse på diffusionen af antigener og antistoffer gennem agaren og gøre tolkningen af resultaterne vanskelig eller umulig. Man må altid være meget omhyggelig med ikke at beskadige agaren, når skiverne lægges på.

Således benyttes vejledningen.

Slå op på TRIN 1.

Læs TRINENE i rækkefølge 1, 2, 3, o.s.v. indtil vejledningen anviser andet. I så fald følges disse anvisninger.

Vejledningen anvendes, indtil man er fuldt fortrolig med materialerne og rækkefølgen i undersøgelsen.

ORBIT kan kun anvendes til artsidentifikation på hele, rå kødstykker.

ORBIT kan ikke anvendes til hakket eller på anden måde findelt kød eller til kogte kødprodukter.

Kontrol med kryds-kontamination.

Sørg altid for

At tage -A-skiven med A-pincetten. At tage -B-skiven med B-pincetten. At tage -S-skiven med S-pincetten.

Skyl og tør kniv og S-pincet omhyggeligt mellem hver prøve.

Kølig opbevaring.

Sørg altid for

At opbevare glassene med -A- og -B-skiver og ORBIT agarpladerne i køleskabet, og kun have dem fremme kortest mulig tid ved brug.

TRIN 1

Udvælg et parti til undersøgelse med ORBIT.

TRIN 2

Tag en ren, skarp kniv, filtpen, en klar plastikprøvepose og et par rene papirhåndklæder.

TRIN 3

Skriv med filtpennen partiets identifikationskode på plastposen.

TRIN 4

Tag kniven, pennen, prøveposen og papirhåndklæderne med hen til partiet. Vælg den karton, der skal tages prøve fra og skriv med pennen identifikationskoden for partiet på kartonen.

TRIN 5

Udvælg et stykke kød med så lidt fedt og bindevæv som muligt. Tag dette stykke op fra kartonen og læg det på et rent sted.

TRIN 6

Udskær fra dette stykke en prøve magert kød ca. 5x5x5 cm og læg denne prøve i den mærkede pose.

TRIN 7

Læg resten af kødet tilbage i kartonen.

OBS

Hvis der skal udtages flere prøver, skal kniv og hænder skylles og tørres omhyggeligt mellem hver prøve.

TRIN 8

Tag prøven i posen og alle de andre remedier med tilbage til arbejdsbordet og anbring dem på en ren flade.

TRIN 9

Er den udtagne prøve fuldstændigt optøet?

Hvis JA - gå til TRIN 11

Hvis NEJ - gå til TRIN 10

TRIN 10

Lad prøven forblive i posen, indtil den er fuldstændigt optøet, enten ved at ligge ved stuetemperatur, ved nedsænkning i vand eller på en anden måde, blot der sørges for, at prøven ikke koges eller udtørres.

Lige så snart prøven er optøet, fortsættes med TRIN 11.

TRIN 11

Tag glassene med -A- og -B-skiver og en ORBIT agarplade fra køleskabet.

Anbring disse nær prøven på den rene flade og lad dem stå, indtil de har stuetemperatur (normalt 10-20 minutter).

TRIN 12

Find glasset med -S-skiver, de tre mærkede pincetter og et stykke hvidt papir frem og anbring dem nær prøven på den rene flade.

TRIN 13

Anbring ORBIT agarpladen på det hvide stykke papir og drej den således at -A-ringen er nederst, -B-ringen øverst og de to -Sringe til venstre og højre. Tag låget af skålen og læg det ved siden af.

TRIN 14

Tag glasset med -A-skiver og den A-mærkede pincet. Åbn glasset og tag med Pincetten en -A-skive.

OBS

Hæld ikke skiver fra glasset ud på bordet. Dette kan krydskontaminere skiverne og sløre undersøgelsesresultaterne.

TRIN 15

Brug pincetten til at anbringe -A-skiven på agarens overflade direkte over A-ringen.

OBS

Hvis -A-skiven ikke ligger præcist over A-ringen, skal skiven straks flyttes. Forsøg ikke at få skiven til at glide henover agarfladen, da dette kan ødelægge agaren og således give fejl i undersøgelsesresultaterne.

Løft altid skiven med pincetten og læg den på den korrekte plads.

TRIN 16

Tryk let på -A-skiven med pincetten for at sikre god kontakt til agaren.

OBS

Pres ikke så hårdt, at agaroverfladen ødelægges, da dette kan give fejlagtige resultater.

TRIN 17

Luk atter glasset med -A-skiver og læg glasset og den A-mærkede pincet til side.

TRIN 18

Tag glasset med -B-skiver og den B-mærkede pincet. Åben glasset og tag med pincetten en -B-skive fra glasset.

OBS

Hæld ikke skiver fra glasset ud på bordet. Dette kan krydskontaminere skiverne og sløre undersøgelsesresultaterne.

TRIN 19

Brug pincetten til at anbringe -B-skiven på agarens overflade direkte over B-ringen.

OBS

Hvis -B-skiven ikke ligger præcist over B-ringen, skal skiven straks flyttes. Forsøg ikke at få skiven til at glide henover agarfladen, da dette kan ødelægge agaren og således give fejl i undersøgelsesresultaterne.

Løft altid skiven med pincetten og læg den på den korrekte plads.

TRIN 20

Tryk let på -B-skiven med pincetten for at sikre god kontakt til agaren.

OBS

Pres ikke så hårdt, at agaroverfladen ødelægges, da dette kan give fejlagtige resultater.

TRIN 21

Luk atter glasset med -B-skiver og læg glasset og den B-mærkede pincet til side.

TRIN 22

Tag prøven ud af posen. Bred posen ud og anbring stykket herpå. Skær med kniven et snit tværs over og omtrent 3/4 gennem stykket.

TRIN 23

Tag glasset med -S-skiver og den S-mærkede pincet. Åbn glasset og tag med pincetten en -S-skive fra glasset.

OBS

Hæld ikke skiver fra glasset ud på bordet. Dette kan krydskontaminere skiverne og sløre undersøgelsesresultaterne.

TRIN 24

Åben snittet i kødstykket og anbring ved hjælp af pincetten -S-skiven ca. midt på den ene snitflade. Skiven må ikke røre fedt- eller bindevæv.

Læg pincetten ved kniven.

OBS

Lad ikke skiven falde ned i bunden af snittet. Dette kan overmætte skiven og give unøjagtige undersøgelsesresultater.

TRIN 25

Pres prøvens to snitflader forsigtigt sammen, således at begge sider af -S-skiven er i kontakt med kødet.

Lad -S-skiven være i kontakt med prøven i præcis 10 sekunder.

OBS

Pres ikke for hårdt på prøvens sider, medens -S-skiven er anbragt derimellem, da dette kan overmætte skiven og give unøjagtige undersøgelsesresultater.

TRIN 26

Tag den S-mærkede pincet. Åben snittet i prøven og tag med Pincetten -S-skiven ud.

TRIN 27

Læg med pincetten -S-skiven på agaroverfladen direkte over -S-ringen til højre.

OBS

Hvis -S-skiven ikke ligger præcist over S-ringen, skal skiven straks flyttes. Forsøg ikke at få skiven til at glide henover agarfladen, da dette kan ødelægge agaren og således give fejl i undersøgelsesresultaterne.

Løft altid skiven med pincetten og læg den på den korrekte plads.

TRIN 28

Tryk let på -S-skiven med pincetten for at sikre god kontakt til agaren.

OBS

Pres ikke så hårdt, at agaroverfladen ødelægges, da dette kan give fejlagtige resultater.

TRIN 29

Luk atter glasset med -S-skiver og læg glasset og den S-mærkede pincet til side.

TRIN 30

Vend forsigtigt petriskålen om på det hvide papir.

Aflæs identifikationskoden fra prøveposen og skriv med filtpennen denne kode på bunden af skålen mellem kanten af -S-skiven og skålens rand.

OBS

Skriv ikke i området mellem -A-, -B- og -S-ringene. Dette vil forstyrre aflæsningen af undersøgelsesresultaterne.

TRIN 31

Vend atter forsigtigt ORBIT agarpladen om og stil den, som den stod før.

BEMÆRK

Hvis der er endnu en optøet prøve klar til undersøgelse, skal hænder, kniv og S-mærket pincet skylles og tørres grundigt, inden man begynder på denne. Start derefter atter fra TRIN 22 og gentag proceduren. Ved TRIN 27 lægges -S-skiven nu på den venstre -S-ring.

TRIN 32

Sæt låget godt fast på ORBIT agarpladen og anbring den ved stuetemperatur et sted, hvor den kan stå uforstyrret til næste dag.

Læg ubrugte ORBIT plader i en tæt tillukket plastpose og anbring denne og glassene med -A- og -B- skiver i køleskab.

Opbevar øvrige ORBIT materialer tørt.

TRIN 33

ORBIT inkuberer nu.

TRIN 34

Udvælg en egnet bordlampe til brug ved aflæsningen, helst med lysstofrør. Tag det sorte stykke papir og fastgør dets ene side med tape til lampeskærmens bagkant, således at det hænger lodret ned herfra. Gå videre til TRIN 35.

TRIN 35

Når ORBIT pladen har inkuberet mindst 15 timer, fjernes låget.

BEMÆRK

Aflæsningstidspunktet kan tilpasses efter arbejdstiden.

TRIN 36

Tænd for lampen og hold ORBIT pladen langs lampeskærmens forkant i samme plan som det sorte papir på bagkanten.

Drej skålen så -A-skiven er nederst, -B-skiven øverst, og -S-skiverne til hver sin side.

TRIN 37

Studer nøje agarlaget mellem -A- og -B-skiverne.

Er der dannet en hvid linie i agaren omtrent midtvejs mellem -A-og - B-skiverne?

Hvis JA, gå til TRIN 41.

Hvis NEJ, gå til TRIN 38.

TRIN 38

Er der gået 30 timer siden ORBIT skålen blev sat til inkubation?

Hvis JA, gå til TRIN 39.

Hvis NEJ, gå til TRIN 40.

TRIN 39

En linie udviklet i området mellem -A- og -B-skiverne kaldes oksekøds-referencelinien. Hvis der ikke er udviklet en referencelinie i agarpladen, tyder det på alvorlige problemer med enten -A- antioksekøds-antistof-skiverne eller -B-oksekøds-referenceantigen- skiverne.

TRIN 40

Sæt låget godt fast på ORBIT agarpladen igen og stil den tilbage til videre inkubation.

Når der er gået nogen tid, prøver man igen fra TRIN 37.

TRIN 41

Den dannede linie mellem -A- og -B-skiverne kaldes oksekødsreferencelinien og er et udtryk for normal aktivitet i både - A- og -B- skiverne.

Denne linie er ORBIT's positive kontrol.

TRIN 42

Undersøg nu grundigt agarlaget i området mellem -A-skiven og den højre -S-skive.

Er der dannet en linie fra oksekøds-referencelinien i en vinkel ned omtrent midtvejs mellem -A-skiven og den højre - S-skive og/eller mellem -A-skiven og den venstre -S-skive?

Hvis JA, gå til TRIN 43.

Hvis NEJ, er prøven ikke oksekød.

BEMÆRK SPECIELT

Hvis der dannes andre linier nær skiven, og disse linier ikke er fortsættelser af oksekøds-referencelinien, besvares med et NEJ.

TRIN 43

Betragt ORBIT resultatet som positivt og dermed, at undersøgelsen har vist, at prøven repræsenteret ved -S-skiven er oksekød.

Ingen