Cirkulæreskrivelse om metoder til undersøgelse for trikiner på de eksportautoriserede slagterier

BILAG 1

METODER TIL UNDERSØGELSE FOR TRICHINA SPIRALIS

I. TRIKINOSKOPISK UNDERSØGELSE

a) Apparatur

Et glødelampetrikinoskop med 50 x og 80-100 x forstørrelse.

Et kompressorium bestående af to glasplader - af hvilke den ene er inddelt i lige store felter - en lille krum saks, en pincet, en kniv til udtagning af prøver, små nummererede beholdere til separat opbevaring af prøverne, en pipette, et lille glas med eddikesyre og et lille glas med kaliumhydroxid til klaring af eventuelle forkalkninger eller til blødgøring af indtørret kød.

b) Udtagning af prøver

Ved hele dyrekroppe udtages der mindst en prøve på størrelse med en hasselnød fra diafragmas to hovedmuskler ved overgangen til den senede del. Hvis der kun forefindes en af diafragmas hovedmuskler, udtages der en prøve på størrelse med to hasselnødder. Hvis begge hovedmusklerne i diafragma mangler, udtages der to prøver. omtrent på størrelse med en hasselnød, fra diafragmas ribbens- eller brystbensafsnit eller, afhængig af omstændighederne, fra tunge-, kæbe- eller bugmuskulaturen.

Ved kødstykker udtages der tre fedtfattige prøver - om muligt på størrelse med en hasselnød - fra skeletmuskulaturen, udtaget på forskellige steder så tæt som mulig ved ben eller sener.

c) Metode

Ved hele dyrekroppe og ved tilstedeværelse af begge hovedmuskler i diafragma udskærer den, der foretager trikinundersøgelse, 7 stykker af hver af de ovennævnte prøver, dvs. i alt 14 eller, hvis der kun forefindes en hovedmuskel i diafragma, 14 stykker på størrelse med en havrekerne fra forskellige steder, helst ved overgangen fra den muskulære til den senede del, og presser dem sammen mellem glaspladerne, således at almindelig trykt skrift kan læses tydelig gennem præparatet.

Hvis de kødprøver, der skal undersøges, er indtørrede og gamle, skal præparaterne blødgøres i en blanding, bestående af 2n del kaliumhydroxid-opløsning og to dele vand, i 10-20 minutter, inden de presses.

Hvis der ved hele dyrekroppe skal udtages prøver fra diafragmas ribbens- eller brystbensafsnit, tunge-, kæbe- eller bugmuskulaturen, skal der udskæres 14 stykker på størrelse med en havrekerne af hver prøve, dvs. i alt 28.

Den, der foretager trikinundersøgelsen, skal udskære 4 stykker på størrelse med en havrekerne af hver af de prøver, der er udtaget af kødstykkerne, dvs. i alt 12 stykker.

Den trikinoskopiske undersøgelse skal udføres således, at hvert præparat studeres langsomt og omhyggelig. Hvis den trikinoskopiske undersøgelse afsløret mistænkelige områder, hvis natur ikke kan fastslås med bestemthed selv ved kraftig forstørrelse i trikinoskopet, skal disse områder undersøges i mikroskop.

Den mikroskopiske undersøgelse bør udføres således, at hvert præparat studeres langsomt og omhyggelig ved 30-40 x forstørrelse.

I de tilfælde, hvor der er tvivl om resultatet, skal undersøgelsen fortsættes med yderligere prøver og præparater, om nødvendig med kraftigere forstørrelse, indtil der ikke længere hersker nogen tvivl. Den trikinoskopiske undersøgelse skal foretages i mindst tre minutter.

I de tilfælde, hvor der er tale om erstatningprøver udtaget fra hovedsmusklerne i diafragmas ribbens- eller brystbensafsnit, tunge-, kæbe- eller bugmuskulaturen, skal den trikinoskopiske undersøgelse foretages i mindst seks minutter.

I den mindste tid, der er fastsat for undersøgelsen, er ikke medregnet den tid, der medgår til prøveudtagning og fremstilling af præparater.

Den almindelige regel er, at den person, der foretager trikinundersøgelsen, ikke bør kontrollere mere end 840 stykker pr. dag, undtagelsesvis dog op til 1050.

II. FORDØJELSESMETODEN

a) Apparatur og materiel

- en kniv til udtagning af prøver,

- små nummererede beholdere med lukke til opbevaring af prøver og med henblik på en eventuel gentagelse af undersøgelserne,

- et varmeskab,

- en 2-3 liter glastragt med stativ, en forbindelsesslange af gummi, spændbøjler til fastgørelse af forbindelseslangen,

- en plastiksi (ca. 18 cm i diameter, maskevidde ca. 1 mm),

- gaze,

- et lille tilspidset rør med lukket spids,

- glasblokskål,

- en kødkværn,

- stereomikroskop (15-40 gange forstørrelse) med tilstrækkelig lys

- fordøjelsesvæske bestående af

10 g pepsin (80 pr. g FIP: Federation Internationale de Pharmacie), 5 ml HCL (mindst 37%). der blandes op med ledningsvand, således at der er en liter i alt.

b) Udtagning af prøver

1. Ved hele dyrekroppe udtages der en prøve på mindst 20 g af en af diafragmas hovedmuskler ved overgangen til den senede del. Hvis hovedmusklerne i diafragma mangler, udtages der en prøve på mindst 20 g af diafragmas ribbens- eller brystbensafsnit eller af tunge-, kæbe- eller bugmuskulaturen.

2. Ved kødstykker udtages der en fedtfattig prøve på mindst 20 g af skeletmuskulaturen så tæt som mulig ved ben eller sener.

c) Metode

Til undersøgelse af en samleprøve fra ti svin laves der en 10 g prøve af hver enkelt 20 g prøve. De resterende 10 g opbevares til en eventuel undersøgelse af en individuel prøve, hvis dette skulle blive nødvendig. Ti prøver, hver på 10 g, samles til en samleprøve; prøven males i en kødkværn (plade med 2 mm huller), hvorefter den spredes løst ud på en si, dækket med et lag gaze. Sien anbringes på oven i en tragt, der via en gummislange er forbundet med et lille tilspidset rør med lukket spids; tragten fyldes fra kanten med fordøjelsesvæske, indtil prøvematerialet er fuldstændig dækket. Forholdet mellem prøvematerialet og fordøjelsesvæsken skal være ca. 1:20 - 1:30. Efter 18-20 timer i varmeskab ved 37-38 grader C fjernes det lille tilspidsede rør.

Efter forsigtig opsugning af den væske, der svømmer ovenpå, vaskes det bundfald, der findes i rørets spids, omhyggelig i en blokskål. Undersøg, om bundfaldet indeholder trikiner, ved hjælp af et stereomikroskop ved 20-40 x forstørrelse.

Hvis resultatet af undersøgelsen af en samleprøve er positivt eller usikkert, bør de resterende individuelle prøver undersøges enkeltvis efter supplering med yderligere 20 g udtaget fra hvert svin eller, hvis det drejer sig om kødstykker, med 20 g udtaget af hvert stykke eller hver stump i overensstemmelse med pkt. b).

III. FORDØJELSESMETODEN TIL UNDERSØGELSE AF SAMLEPRØVER

a) Apparatur og reagenser

- kniv og pincet til indsamling af prøver,

- kødkværn med huller med diameter mellem 2 og 3 mm,

- en 3-liter erlenmeyerkolbe med gummi- eller vatprop.

- en konisk skilletragt, rumindhold 2000 ml.

- et almindelig A-stativ, ca. 28 cm lang og med 80 cm stang.

- en ring, ca. 10-11 cm i diameter, der kan monteres på stativet,

- en klemme med flad skruestik (23 x 40 mm) som kan sættes på stativet ved hjælp af en dobbelt spændering.

- en si (med en maskevidde på 177 micron) med udvendig diameter på 11 cm, med trådnet af messing eller rustfrit stål,

- en tragt med indvendig diameter på ikke under 12 cm,

- 100 ml måleglas,

- et stereomikroskop (15-40 x forstørrelse) med tilstrækkelig lys, eller et trikinoskop med horisontalt bord til kompressoriet med tilstrækkelig lys,

- hvis der benyttes trikinoskop: et larvetællebassin, der fremstilles af 3 mm tykke acrylplader

i) bundstykket skal være 180 x 40 mm og skal være inddelt i felter;

ii) sidestykkerne skal være 230 x 20 mm;,

iii) endestykkerne skal være 40 x 20 mm; bundstykke og endestykker anbringes mellem sidestykkerne, så der dannes en skål med to små håndtag i begge ender; bundstykkets overside skal ligge 7-9 mm over den nederste kant af den af side- og endestykker dannede ramme; delene samles ved hjælp af en lim der er egnet til materialet;

- et antal petriskåle med en diameter på 9 cm (hvis der anvendes stereomikroskop), der på undersiden er forsynet med 10 x 10 mm store undersøgelsesfelter indridset med et spidst instrument,

- et antal 10 liter spande, der kan anvendes til dekontaminering ved formolbehandling af apparaturet og den resterende fordøjelsesvæske i tilfælde af positiv reaktion,

- konceniteret (37 %) saltsyre,

- pepsin, styrke: 1:10 000 NF (U.S. National Formulary) svarende til 1:12500 BP (British Pharmacopoea) svarende til 2000 FIP (Federation Internationale de Pharmacie).

- bakker med 50 afmærkede felter, der hver kan rumme 2 g kød,

- en vægt der kan veje med en nøjagtighed på 0,1 g.

b) Udtagning af prøver

1. Ved hele dyrekroppe udtages der en prøve på ca. 2 g af en af diafragnapillerne ved overgangen til den senede del. Hvis diafragmapillerne mangler, udtages der en prøve på Mindst 2 g af diafragmas ribbens- eller brystbensafsnit eller af tunge-, kæbe- eller bugmuskulaturen.

2. Ved kødstykker udtages der en fedtfattig prøve på ca. 2 g af skeletmuskulaturen så tæt som mulig ved ben eller sener.

c) Metode

1. i) Komplette samleprøver (bestående af 100 enkeltprøver)

Der udtages ca. 1 g af hver af de 100 prøver. Samleprøven males i kødkværnen.

Det malede kød lægges i 3-Liter erlenmeyerkolben sammen med 7 g pepsin, ca. 2 liter ledningsvand, ca. 40-41 grader C og 25 ml koncentreret saltsyre. Blandingen rystes, så pepsinen opløses.

Opløsningens pH-værdi vil være ca. 1,5-2.

- Erlenmeyerkolben sættes i varmeskab ved 40-41 grader C i ca. 4 timer til fordøjelse. Kolben rystes regelmæssig i løbet af fordøjelsesprocessen, mindst to gange i timen.

- Den fordøjede opløsning filtreres gennem sien ned i den koniske 2- liter skilletragt og henstår urørt i stativet i mindst en time.

- Ialt ca. 45 ml aftappes fra skilletragten i et måleglas og fordeles i tre petriskåle, som i bunden er opdelt i kvadrater med ca. 15 ml i hver.

- Hver petriskål undersøges minutiøst under stereomikroskopet for trikinlarver.

- Hvis der anvendes larvetællebassiner, fordeles de 45 ml i to af disse og undersøges med trikinoskopet.

Larverne viser sig som snoede organismer i bundfaldet og ligner næsten urfjedre. De er lette at identificere, og udviser ofte spiralbevægelser, når vandet er lunkent.

- Fordøjelsesvæskerne undersøges, så snart de er parat. Undersøgelsen må under ingen omstændigheder udsættes til den følgende dag.

Hvis prøverne er uklare, eller hvis de ikke er undersøgt i løbet af 30 minutter, behandles de på følgende måde. Den endelige prøve på 45 ml hældes i et måleglas og henstår i 10 minutter. Derefter opsuges 30 ml af supernatanten, og til de resterende 15 ml tilsættes så meget ledningsvand, at væsken fylder 45 ml. Efter at væsken har henstået til bundfældning yderligere 10 minutter, opsuges 30 ml af supernatanten, og de resterende 15 ml hældes i en petriskål eller et larvetællebassin til undersøgelse. Måleglasset skylles med 10 ml ledningsvand og dette skyllevand overføres til prøven i petriskålen eller larvetællebassinet for at blive undersøgt.

ii) Mindre samleprøver (under 100 enkeltprøver)

Indtil 15 enkeltpraver kan sættes til en samleprøve bestående af 100 enkeltprøver og undersøges sammen med disse. Såfremt mere end 15 prøver og mindre end 100 prøver skal undersøges reduceres mængden af fordøjelsesvæske proportionalt.

2. Hvis resultatet af undersøgelsen af en samleprøve er positivt eller usikkert udtages der i overensstemmelse med punkt b) en ny prøve på 20 g fra hvert svin prøverne fra 5 svin undersøges samlet efter ovennævnte metode. På denne måde undersøges prøver fra 20 grupper a 5 svin. Hvis der påvises trikiner i en samleprøve fra 5 svin, indsamles der nye prøver a 20 g fra hver dyr i gruppen, og disse prøver undersøges hver for sig i overensstemmelse med ovennævnte metode.

IV. DEN MEKANISKE FORDØJELSESMETODE TIL UNDERSØGELSE AF SAMLEPRØVER VED SEDIMENTERINGSTEKNIK

a) Apparatur og reagenser

- kniv eller saks til udtagning af prøver,

- bakker med 50 afmærkede felter, der hver kan ramme 2 g kød,

- en Stomacher Lab-blender, model 3500 Therno,

- plastposer, der passer til blenderen,

- 2-liters koniske skilletragte, helst med teflonhaner,

- stativer, ringe og klemmer,

- Sier, med en maskevidde på 177 micron og en udvendig diameter på 11 cm og med trådnet af rustfrit stål,

- tragte med en indvendig diameter på mindst 12 cm til underlag for sierne,

- 100 ml-måleglas,

- 25 ml-dispenser,

- 3-liters bægerglas,

- ske eller glasstang til omrøring af fordøjelsesvæsken i bægerglasset,

- en plastsprøjte forsynet med en sugespids,

- en måleske, rumindhold 6 g,

- et termometer, der inden for området 1-100 grader C kan måle med en nøjagtighed på 0,5 grader C,

- en vibrator, f.eks, en el-barbermaskine, hvor »hovedet« er fjernet,

- et relæ, der kan tænde og afbryde med et minuts inteval,

- et trikinoskop med vandret bord eller et stereomikroskop med tilstrækkelig lys,

- et larvetællebassin (hvis der benyttes trikinoskop); larvetællebassinet fremstilles af 3 mm tykke acrylplader

i) bundstykket skal være 180 x 40 mm og være inddelt i felter;

ii) sidestykkerne skal være 230 x 20 mm;

iii) endestykkerne skal være 40 x 20 mm;

bundstykket og endestykkerne anbringes mellem sidestykkerne, så der dannes en skål med to små håndtag i begge ender; bundstykkets overside skal ligge 7-9 mm over den nederste kant af den ramme side- og endestykkerne danner; delene samles ved hjælp af en lim, der er egnet til materialet;

- et antal petriskåle med en dimaeter på 9 cm (hvis der anvendes stereomikroskop), der på undersiden er forsynet med 10 x 10 mm store felter indridset med et spidst instrument,

- saltsyre 17,5%,

- pepsin, styrke 1:10000 NF (U.S. National Formulary)

svarende til 1:12500 BP (British Pharmacopoeia)

svarende til 2000 FIP (Federation Internationale de Pharmacie),

- et antal 10-liters spande, der kan anvendes til dekontaminering ved for eksempel formolbehandling af apparatur og den resterende fordøjelsesvæske i tilfælde af positiv reaktion,

- en vægt, der kan veje med en nøjagtighed på 0,1 g.

b) Udtagning af prøver

1. Fra hele dyrekroppe udtages der en prøve på ca. 2 g af en af diafragmapillerne ved overgangen til den senede del. Hvis diafragmapillerne mangler, udtages der en prøve på ca. 2 g af diafragmss ribbens- eller brystbensdel eller af kæbe- eller bugmuskulaturen.

2. Fra udskårne kødstykker tages der en fedtfattig prøve på ca. 2 g af skeletmuskulaturen så tæt som muligt ved ben eller sener.

c) Metode

1. Udførelse

i) Komplette samleprøver (bestående af 100 enkeltprøver)

- En dobbelt plastpose anbringes i blenderen, og temperaturen indstilles til 40-41 grader C.

- 1,5 l vand, der er forvarmet til 32-35 grader C hældes i den inderste plastpose og opvarmes til 40-41 grader C.

- Vandet i blenderen tilsættes 25 ml saltsyre (17,5%).

- Derefter tilsættes 100 prøver a ca. 1 g (ved 25-30 grader C) som er udtaget fra samtlige enkeltprøver i overensstemmelse med punkt b).

- Endelig tilsættes 6 g pepsin. Rækkefølgen for tilsætninger skal nøje overholdes for at undgå nedbrydning af pepsinet.

- Posens indhold behandles nu i blenderen i 25 minuter.

- Posen tages ud af blenderen og fordøjelsesvæsken hældes igennem sien ned i et 3-liters bægerglas.

- Posen skylles med ca. 100 ml vand, som derefter bruges til skylning af sien og derved hældes sammen med filtratet i bægerglasset.

Indtil 15 enkeltprøver kan sættes til en samleprøve bestående af 100 enkeltprøver og undersøges sammen med disse.

ii) Mindre samleprøver (under 100 enkeltprøver)

- En dobbelt plastpose anbringes i blenderen, og temperaturen indstilles til 40-41 grader C.

- Fordøjelsesvæsken fremstilles ved at blande ca. 1,5 l vand og 25 ml saltsyre (17,5%). Derefter tilsættes 6 g pepsin, og det hele blandes ved 40-41 grader C. Denne rækkefølge skal nøje overholdes for at undgå nedbrydning af pepsinet.

- Af fordøjelsesvæsken afmåles en mængde, der svarer til 15 ml pr. g prøve (eksempel: til 30 prøver afmåles 30 x 15 ml - 450 ml); den afmålte væske hældes i den inderste af de to plastposer, og der tilsættes Prøver a ca. 1 g (ved 25-30 grader C), som er udtaget fra samtlige enkeltprøver i overensstemmelse med Punkt b).

- I den yderste plastpose hældes varmt vand (ca. 41 grader C), så den samlede væskemængde i de to poser bliver 1,5 l.

- Posens indhold behandles nu i blenderen i 25 minutter.

- Posen tages ud af blenderen og fordøjelæsvæsken hældes gennem sien ned i et 3-liters bægerglas.

- Posen skylles med ca. 100 ml vand, som derefter bruges til skylning af sien og dermed hældes sammen med filtratet i bægerglasset.

2. Påvisning af ???? ved bundfældning.

- Der tilsættes is (300-400 g skælis eller anden findelt is) til fordøjelsesvæsken, så mængden bliver ca. 2 l. Væsken omrøres, indtil isen er smeltet.

Til mindre samleprøver (se punkt ii) sættes en tilsvarende mindre mængde is.

- Den afkølede fordøjelsesvæske hældes i en 2-liters skilletragt, udstyret med en vibrator i en ekstra klemme.

- Væsken henstår til bundfældning i 30 minutter; i denne periode påvirkes skilletragten ved intermitterende vibration, dvs. vibration i 1 minut og pause i 1 minut.

- Efter 30 minutters forløb aftappes en bundfaldsprøve på 60 ml hurtigt ned i et måleglas (100 ml).

(Efter brugen rengøres tragten med et overfladeaktivt rengøringsmiddel).

- Prøven på 60 ml henstår i mindst 10 minutter, hvorefter supernatanten opsuges, indtil der er 15 ml tilbage til undersøgelse for forekomst af larver.

- Til opsugning kan anvendes en engangssprøjte forsynet med plastrør.

Røret skal have en sådan længde, at der bliver 15 ml tilbage i måleglasset når sprøjtens flanger hviler mod glassets overkant.

- De 15 ml overføres enten til et larvetællebassin ved undersøgelse med trikinoskop eller til to petriskåle ved undersøgelse med stereomikroskop.

- Fordøjelsesvæskerne undersøges, så snart de er parat. Undersøgelsen må under ingen omstændigheder udsættes til følgende dag.

Hvis prøverne er uklare, eller hvis de ikke er undersøgt i løbet af 30 minutter, klares de på følgende måde. Den endelige prøve på 60 ml hældes i et måleglas og henstår i 10 minutter. Derefter opsuges 45 ml af supermatanten, og til de resterende 15 ml sættes så meget ledningsvand, at væsken fylder 45 ml. Efter at væsken har henstået til bundfældning i yderligere 10 minutter, opsuges 30 ml af supernatanten, og de resterende 15 ml hældes i en petriskål eller et larvetællebassin til undersøgelse. Måleglasset skylles med 10 ml ledningsvand og dette skyllevand overføres til prøven i petriskålen eller larvetællebassinet for at blive undersøgt.

3. Hvis resultatet af undersøgelsen af en samleprøve er positivt eller usikkert udtages der i overensstemmelse med punkt b) en ny prøve på 20 g fra hvert svin. Prøverne fra 5 svin undersøges samlet efter ovennævnte metode. På denne måde undersøges prøver fra 20 grupper a 5 svin. Hvis der påvises trikiner i en samleprøve fra 5 svin, udtages der nye prøver a 20 g fra hvert dyr i gruppen, og disse prøver undersøges hver for sig i overensstemmelse med ovennævnte metode.

V. DEN MEKANISKE FORDØJELSESMETODE TIL UNDERSØGELSE AF SAMLEPRØVER VED FILTRERINGSTEKNIK

a) Apparatur og reagenser

Som anført under metode IV, punkt a) samt følgende.

- en 1-liters Gelman-tragt komplet med filterholder (diameter 45 mm),

- finmaskede sier; en si består af

et cirkelrundt rustfrit trådnet med en maskevidde på 35 micron og en diameter på 45 mm;

to gummiringe, der er fremstillet af 1 mm tykt gummi; den ydre diameter skal være 45 mm og den indre 38 mm;

det cirkelrunde trådnet anbringes mellem de to gummiringe, og det hele samles ved hjælp af en to-komponentlim, der er egnet til sammenklæbning af de to materialer;

- en 3-liters Erlenmeyerkolbe med siderør (sugekolbe),

- en vakuumpumpe (vandpumpe),

- plastposer, der kan rumme mindst 80 ml,

- udstyr til tillodning af plastposerne,

- rennilase, styrke 1:150 000 Soxhlet-enheder pr. g.

b) Indsamling af prøver

Se metode IV. punkt b).

c) Metode

1. Udførelse

i) Komplette samleprøver (bestående af 100 enkeltprøver)

Se metode IV, punkt c). punkt 1. i).

ii) Mindre samleprøver (under 100 enkeltprøver)

Se metode IV, punkt c) punkt 1. ii).

2. Påvisning af larver ved filtrering

- Der tilsættes is (300-400 g skælis eller anden findelt is) til fordøjelsesvæsken, så mængden bliver ca. 2 l.

Til mindre samleprøver sættes en tilsvarende mindre mængde is.

- Væsken omrøres indtil isen er smeltet. Den kølede væske henstår derefter i mindst 3 minutter, for at larverne kan rulle sig op i spiraler.

- Gelman-tragten med en finmasket si i filterholderen anbringes på Erlenmeyerkolben, der forbindes med en vakuumpumpe.

- Fordøjelsesvæsken hældes i Gelmantragten og sies. Væskens passage gennem sien kan ved filtreringens slutning lettes ved forsigtig sugning med vakuumpumpen. Sugningen standses, inden sien er tør, dvs. når der er 2-5 ml væske tilbage i tragten.

- Når væsken er siet, fjernes sien og anbringes i en plastpose (80 ml) med 15-20 ml rennilaseopløsning. Opløsningen fremstilles ved at blande 2 g rennilase med 100 ml ledningsvand.

- Plastposen tillodes dobbelt og anbringes i blenderen mellem den fyldte inderste pose og den yderste pose.

- Blenderen skal arbejde i 3 minutter, både når det drejer sig om en komplet og om en mindre samleprøve.

- Efter 3 minutters forløb fjernes plastposen med sien og rennilaseopløsningen fra blenderen og åbnes med en saks. Væsken hældes i et larvetællebassin eller i en petriskål. Posen med sien skylles med 5-10 ml vand, som derefter hældes i larvetællebassinet ved undersøgelse med trikinoskop eller i petriskålen ved undersøgelse med stereomikroskop.

- Fordøjelsesvæskerne undersøges, så snart de er parat. Undersøgelsen må under ingen omstændigheder udsættes til den følgende dag.

Bemærk . Der må kun anvendes helt rene si-skiver. Urene sier må aldrig få lov til at tørre.

Sierne kan renses ved, at de anbringes i rennilaseopløsningen natten over. Inden de tages i brug, bør de ved hjælp af blenderen skylles i en frisklavet rennilaseopløsning.

3. Hvis resultatet af undersøgelsen af en samleprøve er positivt eller usikkert, udtages der i overensstemmelse med punkt b) en ny prøve på 20 g fra hvert svin. Prøverne fra 5 svin undersøges samlet efter ovennævnte metode. På denne måde undersøges prøver fra 20 grupper a 5 svin. Hvis der påvises trikiner i en samleprøve fra 5 svin, indsamles der nye prøver a 20 g fra hvert dyr i gruppen, og disse prøver undersøges hver for sig i overensstemmelse med ovennævnte metode.

VI. MAGNETRØRERMETODEN TIL UNDERSØGELSE AF SAMLEPRØVER

a) Apparatur og reagenser

- kniv og pincet til indsamling af prøver,

- bakker med 50 afmærkede felter, der hver kan rumme 2 g kød,

- en Moulinette-blender,

- magnetomrørere med termostatstyret varmeplade og teflonbeklædte magnetstave ca. 5 cm lange,

- stativer og klemmer og ringe,

- sier, med en maskevidde på 177 micron og udvendig diameter på 11 cm og trådnet af rustfrit stål,

- tragte med en udvendig diameter på mindst 12 cm; tragtene skal kunne rumme sierne.

- 3-liters bægerglas,

- 50-ml måleglas eller centrifugeglas,

- et trikinoskop med vandret bord eller et stereomikroskop med tilstrækkeligt lys,

- et larvetællebassin (hvis der benyttes trikinoskop)

larvetællebassinet fremstilles af 3 mm tykke acrylplader

a) bundstykket skal være 180 x 40 mm og være inddelt i felter

b) sidestykkerne skal være 230 x 20 mm

c) endestykkerne skal være 40 x 20 mm;

bundstykke og endestykker anbringes mellem sidestykkerne, så der dannes en skål med to små håndtag i begge ender; bundstykkets overside skal ligge 7-9 mm over den nederste kant af den ramme side- og endestykkerne danner; delene samles ved hjælp af en lim der er egnet til materialet;

- et antal petriskåle med en diameter på 9 cm (hvis der anvendes stereomikroskop). der på undersiden er forsynet med 10 x 10 mm store felter indridset med et spidst instrument

- aluminiumsfolie.

- saltsyre. 25%,

- pepsin, styrke: 1:10000 NF (U.S. National Formulary)

svarende til 1:12500 Bp (British Pharnacopoea)

svarende til 2000 FIP (Federation Internationale de Pharmacie),

- ledningsvand, der er opvarmet til 46-48 grader C,

- et antal 10-liters spande, der kan anvendes til dekontaminering ved f.eks. formolbehandling af apparaturet og den resterende fordøjelsesvæske i tilfælde af positiv reaktion.

- en vægt der kan veje med en nøjagtighed på 0,1 g.

b) Udtagning af prøver

1. Fra hele dyrekroppe udtages der en prøve på ca. 2 g af en af diafragmapillerne ved overgangen til den senede del. Hvis diafragmapillerne mangler, udtages der en prøve på ca 2 g. af diafragmas ribbens- eller brystbensdel eller af kæbe- eller bugmuskulaturen.

2. Fra udskårne kødstykker tages der en fedtfattig prøve på ca. 2 g af skeletmuskulaturen så tæt som muligt ved ben eller sener.

c) Metode

1. i) Komplette samleprøver (bestående af 100 enkeltprøver)

- 100 Prøver a ca. 1 g udtages fra enkeltprøver udtaget i overensstemmelse med punkt b) og hakkes i blenderen. Blenderen køres 3-4 gange i ca. 1 sekund.

- Det hakkede kød anbringes i et 3-liters målebæger og overdrysses med 10 g Pepsin. 2 l ledningsvand opvarmes til 46-48 grader C og hældes i bægerglasset sammen med 16 ml saltsyre.

- De kødholdige dele af blenderen skylles gentagne gange i fordøjelsesvæsken i bægerglasset for at fjerne tilbageblevne kødrester.

- Magnetstaven anbringes i bægerglasset, der tildækkes med aluminiumsfolie.

- Bægerglasset anbringes på magnetomrørerens varmeplade, som skal være forvarmet og omrøringen påbegyndes. Magnetomrøreren, skal forinden være indstillet så den holder en konstant temperatur på 44- 46 grader C under hele Processen. Under omrøringen skal fordøjelsesvæsken rotere så hurtigt at der dannes en dyb hvirvel uden sprøjt.

- Væsken omrøres i 30 minutter; derefter standses omrøreren, og væsken hældes gennem sien over i skilletragten.

- Væsken henstår derefter i tragten i 30 minutter.

- Efter 30 minutters forløb aftappes en væskeprøve på 40 ml hurtigt ned i et måleglas eller et centrifugeglas.

- Væskeprøven på 40 ml henstår derefter i 10 minutter, hvorefter 30 ml af supenatanten opsuges, så der bliver 10 ml tilbage.

- De resterende 10 ml af bundfaldsprøven hældes i et larvetællebassin eller en petriskål til undersøgelse.

- Måleglas eller centrifugeglas skylles med ca 10 ml ledningsvand, der derefter hældes sammen med prøven i larvetællesbassinet eller petriskålen. Derefter undersøges prøven med trikinoskop eller stereomikroskop.

- Fordøjelsesvæskerne undersøges, så snart de er parat. Undersøgelsen må under ingen omstændigheder udsættes til den følgende dag.

Hvis prøverne ikke er undersøgt i løbet af 30 minutter klares de på følgende måde

Den endelige prøve på ca. 40 ml hældes i et måleglas og henstår i 10 minuter. Derefter opsuges 30 ml af supernatanten og til de resterende 10 ml sættes så meget ledningsvand, at væsken fylder 40 ml. Efter at væsken har henstået til bundfældning i yderligere 10 minutter opsuges 30 ml af supernatanten og de resterende 10 ml hældes i et larvetællebassin eller petriskål til undersøgelse. Måleglasset afvaskes med 10 ml ledningsvand og dette skyllevand overføres til prøven i petriskålen eller larvetællebassinet til undersøgelse.

Hvis en prøve er uklar ved undersøgelsen, hældes den i et måleglas, hvorefter der tilsættes ledningsvand indtil 40 ml. hvorefter den foranbeskrevne fremgangsmåde følges.

ii) Mindre samleprøver (under 100 enkeltprøver)

Om nødvendigt kan indtil 15 enkeltprøver a 1 g sættes til en samlet portion på 100 prøver og undersøges sammen med disse i overensstemmelse med Punkt c) 1.i Hvis der er mere end 15 enkeltprøver, må de undersøges som en hel samleprøve. For samleprøver på indtil 50 prøver kan fordøjelsesvæsken reduceres til 1 liter.

2. Hvis resultatet af en samleprøve er positivt eller usikkert udtages der i overensstemmelse med punkt b) en ny Prøve på 20 g fra hvert svin. Prøverne på 5 svin undersøges samlet efter ovennævnte metode. På denne måde undersøges prøver fra 20 grupper a 5 svin. Hvis der påvises trikiner i en samleprøve fra 5 svin, indsamles der nye prøver a 20 g fra hvert dyr i gruppen, og disse prøver undersøges hver for sig i overensstemmelse med ovennævnte metode.

Cirkulæreskrivelse om metoder til undersøgelse for trikiner på de eksportautoriserede slagterier

I henhold til § 10, stk. 2,B, i landbrugsministeriets instruks af 27. september 1974 med senere ændringer om udøvelse af kødkontrol fastsættes herved de i bilag I angivne metoder til undersøgelse for trikiner.

Cirkulæreskrivelse af 28. september 1979 (K.K. 3590-1979) vedrørende Vesttyskland - trikinkontrol tilbagekaldes herved.

P.V.V.

K. Hermansen

Ingen